杨树中MAX2同源基因的克隆

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chaixiaoliyanqiong
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分枝为植物非常复杂的生理发育过程,涉及到多种生理机制,植物激素对分枝的影响是其中重要的一环。2008年发现了一类新型植物激素——独脚金内酯(strigolactone, SLs),其功能为参与调控植物地上部分分枝。当前,关于独脚金内酯调控分枝的机理机制研究已取得一定进展,在拟南芥(Arabi-dopsis thaliana)、水稻(Oryza sativa)、豌豆(Pisum sativum L.)、矮牵牛(petunia hybrida)等物种中已克隆出许多与独脚金内酯相关的基因。但至今独脚金内酯的合成和信号传导的具体途径尚不清晰,在不同物种中已克隆的基因亦有限,特别是其在木本植物中的作用机制还处于起步阶段。而杨树作为木本植物中的模式植物,探究独脚金内酯对其分枝机理的具影响有重要意义。本实验通过生物信息学方法,调取11个拟南芥与独脚金内酯合成及信号转导相关的基因,比对出其在毛果杨(Populus trichocarpa)中对应的同源基因,对筛选出的毛果杨独脚金内酯各途径的同源基因,分析各基因的功能及表达情况,挑选出拟南芥及毛果杨独脚金内酯信号转导途径中MAX2的同源基因为目的基因进行克隆。目前,实验部分使用Gateway方法已克隆出AtMAX2基因(AT2G42620),同时将AtMAX2基因在Col-0型拟南芥中过量表达;同时,以欧洲山杨×银白杨(Populus tre mula×P. Alba INRA clone N717 1-B4)组培苗为植物材料,将AtMAX2在717杨树中过量表达;克隆出杨树中MAX2的同源基因PtrMAX2c (Potri.006G068500).构建已转化AtMAX2到717杨,已鉴定出阳性植株;构建已转化PtrMAX2c基因到Col-0型拟南芥中,已得到PtrMAX2c转AT T1代种子;经过3代拟南芥植株的阳性苗筛选及RT-PCR表达量鉴定,已得到AtMAX2转Col-0型拟南芥过量表达转基因植株的纯合子株系9个;通过阳性苗筛选筛选及RT-PCR表达量鉴定,筛选出At-MAX2转717杨树过量表达株系3个。
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