【摘 要】
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E.coli中存在数十种RNA酶,其中以RNase E为中心的RNA降解复合体调控许多RNA的代谢过程,对细胞的正常生长及适应外界各种环境十分重要。然而,由于原核生物的多样性,不同物种中
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E.coli中存在数十种RNA酶,其中以RNase E为中心的RNA降解复合体调控许多RNA的代谢过程,对细胞的正常生长及适应外界各种环境十分重要。然而,由于原核生物的多样性,不同物种中RNA酶对RNA代谢的调控方式可能存在很大差异。例如,与E.coli相比,Bacillus subilis中存在一个以RNase Y,而不是以RNase E为核心的RNA降解复合体。目前除五.coli和B.subtilis,人们对其他原核生物中RNA酶生理功能的了解还十分有限。蓝细菌是一类能够进行产氧光合作用的原核生物,具有十分悠久的进化历程。基因组分析表明,蓝细菌中存在许多与其他细菌高度同源的RNA酶。为探讨蓝细菌中的RNA酶与胞内各种生理代谢活动之间的相互调控关系,本文以鱼腥蓝细菌PCC 7120为研究材料,对其胞内多种RNA酶在蛋白水平上的表达情况进行了研究。首先,利用重组表达的鱼腥蓝细菌RNA酶免疫家兔,制得针对各个RNA酶的特异性抗体。随后,抽提了不同生长时期及缺氮条件下的鱼腥蓝细菌PCC 7120总蛋白,通过Western Blot检测了各RNA酶的表达情况。结果表明,各RNase在正常生长条件下表达比较稳定,缺氮诱导后表达量有的下降,有的上升,有的保持不变,但缺氮72h后所有RNA酶基本都会恢复到缺氮前表达水平。值得注意的是,RNaseE蛋白在缺氮后会被蛋白酶特异性剪切,只剩下N末端。进一步的实验表明,参与该剪切过程的是一种二价金属依赖性蛋白酶。鱼腥蓝细菌PCC 7120的RNase E与E.coli的RNaseE的序列特征类似,其N末端为催化域,而C末端结构松散,可能与其他蛋白结合以形成RNA降解复合体。因此,RNaseE在缺氮后发生的剪切现象可能是细胞对缺氮过程中RNA代谢的一种特殊调控方式。
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