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第一部分 EGCG通过活化p38αMAPK-Bax途径诱导NB4细胞凋亡目的:本实验主要探讨EGCG是否能够诱导NB4细胞凋亡及其可能的分子机制。方法:分别用不同浓度的EGCG处理NB4细胞,或预先用p38αMAPK的抑制剂PD169316处理NB4细胞半小时,再用相应浓度的EGCG处理NB4细胞。用CCK-8方法测定NB4细胞增殖状况,用FITC-Annexin V/PI双染色法测定NB4细胞凋亡状况,用Western-Blot检测p38αMAPK、p-p38αMAPK、Bcl-2和Bax蛋白质的表达水平。结果:随着EGCG浓度的增加,CCK-8结果显示EGCG依赖浓度梯度抑制NB4细胞增殖;流式细胞术发现EGCG能够明显促进NB4细胞凋亡;同时Western-Blot检测发现p-p38αMAPK和Bax蛋白质表达水平升高,与EGCG浓度呈正相关,然而Bcl-2蛋白质表达水平随EGCG浓度升高而降低。在用p38αMAPK抑制剂处理后,CCK-8结果表明EGCG抑制细胞增殖的能力明显减弱,同时流式细胞术显示EGCG促进细胞凋亡的能力也减弱;Western-Blot结果显示Bax蛋白质表达程度降低,但Bcl-2蛋白质表达程度无明显变化。结论:EGCG可能通过活化p38αMAPK-Bax途径诱导NB4细胞凋亡。第二部分 EGCG通过SHP-1调节的p38αMAPK-Bax途径诱导NB4细胞凋亡目的:本实验主要观察EGCG是否通过SHP-1调节的p38αMAPK-Bax途径诱导NB4细胞凋亡。方法:分别用不同浓度的EGCG处理NB4细胞,或预先用SHP-1的抑制剂NSC87877处理NB4细胞半小时,再用相应浓度的EGCG处理NB4细胞。用CCK-8方法测定NB4细胞增殖状况,用FITC-Annexin V/PI双染色法检测NB4细胞凋亡状况,用Western-Blot检测SHP-1、p38αMAPK、p-p38αMAPK和Bax蛋白质的表达水平。结果:Western-Blot检测结果显示EGCG能够促进SHP-1蛋白质表达。预先用SHP-1抑制剂NSC87877处理后,SHP-1蛋白质的表达水平明显降低;同时CCK-8结果显示EGCG抑制细胞增殖的能力减弱,流式细胞术结果表明EGCG促进细胞凋亡的能力也减弱,Western-Blot检测结果显示p-p38αMAPK和Bax蛋白质表达水平随之减少,但p38αMAPK蛋白质表达水平无明显变化。结论:EGCG通过SHP-1调节的p38αMAPK-Bax途径诱导NB4细胞凋亡。