90年代从成年哺乳动物个体脑区分离出了能不断分裂增殖且具有多方向分化潜能的细胞群,并提出了神经干细胞的概念。从此打破了成年哺乳类动物神经系统通常被看作非再生性组织的旧观念。本实验研究目的：1、建立稳定的胚胎神经干细胞分离培养方法体系。2、进行神经干细胞移植治疗脑出血的初步尝试。实验方法：取胚龄14-16天SD大鼠脑组织采用无血清培养方法，在bFGF（碱性成纤维细胞生长因子basic fibroblast growth factor）作用下培养神经干细胞。去除生长因子加5%胎牛血清条件下进行分化培养。采用荧光免疫组化方法鉴定培养所得神经干细胞团和其分化后的细胞。制作大鼠脑出血模型，分为模型对照组、出血3天标记干细胞注入组、出血7天标记干细胞注入组、bFGF注入组。观察其功能恢复和干细胞在实验动物体内增殖情况。结果：原代与传代培养的细胞均可以持续分裂增殖形成悬浮生长的神经球，nestin（巢素蛋白）表达呈阳性说明确为神经干细胞。分化后经荧光免疫组化方法鉴定分化后细胞类型，MAP2抗体特异性识别神经元，CNP抗体特异性识别少突胶质细胞，GFAP抗体特异性识别星形胶质细胞。证明神经干细胞主要分化为三种基本神经组织细胞类型：神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞。移植实验结果显示各组动物在移植操作后28天均有不同程度的功能恢复，其中7天移植组大鼠功能恢复效果最好，脑组织病理切片显示注入的神经干细胞存活，实验机体自身也有干细胞增殖。讨论：神经干细胞是一种未分化状态的原始神经前体细胞，具有自我更新、多方向分化潜能、低免疫原性三个特点。非常适合神经组织损伤后的移植,研究神经干细胞对脑出血后缺损神经组织的修复替代以及功能改善具有十分重要的理论意义和实用价值。成年个体环绕侧脑室的室管膜下层、纹状体、海马等地方存在神经干细胞,正常情况下这些细胞处于静止状态,如能将其在体内诱导增殖 、分化以替代疾病中缺损的神经细胞，将为神经损伤的修复带来新的希望。不同部位,不同种类神经元的<WP=6>再生、分化各有其特点,需要不同调节因子的精确控制,因此,阐明不同调节因子在神经中枢不同部位的调节特性也是今后神经干细胞研究的一项重要内容。尽管目前尚不能准确有效的诱导神经干细胞特异性定向分化为某种特定的神经元,但随着人们对细胞间信号传递机制认识的不断加深和新的细胞因子、化学信号的不断发现，人类将能够解决从全能干细胞、多能干细胞到神经干细胞、定向神经祖细胞直至特异类型神经细胞的定向分化,完成神经元之间的功能重建,为最终解决中枢神经再生这一难题而开辟道路。