论文部分内容阅读
目的:1.研究不同浓度三氧化二砷对于HepG2细胞存活率的影响;2.研究三氧化二砷联合射频消融是否可扩大肿瘤射频消融毁损面积。方法:1.复苏并培养HepG2肝癌细胞,取对数生长期HepG2细胞种于96孔板,置于37℃、5%CO2恒温培养箱中,培养12小时后,使用光学显微镜观察细胞贴壁后,设置空白对照C组（加入等量PBS）、及不同浓度三氧化二砷实验组L（5μmol/L）、M（10μmol/L）、N（20μmol/L）、H（30μmol/L）,继续培养24小时后电子显微镜下观察细胞形态及分布变化,应用MTT法检测各组OD值,采用存活率%（S）=（实验组OD/对照组OD）×100%,对照组细胞存活率按100%计算,统计并比较各组细胞平均存活率。2.裸鼠荷瘤建模:24只5周龄免疫缺陷雄性裸鼠（BALB/c）（20g±2g）于右前肢腋中线注射0.1mL对数生长期HepG2肝癌细胞（2×106个/ml）,于SPF条件的层流架上饲养,遵循无菌原则,垫料、饲料、水消毒,裸鼠自由摄食,每3天测量肿瘤大小,肿瘤生长至1cm×1cm大小,开始实验干预。3.射频消融与射频消融联合三氧化二砷干预:24只荷瘤裸鼠随机分为四组（N=6）,单纯射频消融R组:直接行射频消融（70℃±2℃）5分钟;余三组（T1组、T2组、T3组）裸鼠同时腹腔注射三氧化二砷（5mg/kg）,T1组、T2组、T3组分别于1小时后、3小时后、6小时后行射频消融（70℃±2℃）5分钟。干预后处死取瘤。4.检测指标:肿瘤标本经组织固定液固定,行石蜡切片免疫组化（CD31染色）,分别检测肿瘤微血管密度、肿瘤损毁面积。结果:1.不同浓度三氧化二砷作用于HepG2细胞后镜下观（放大200倍）:在给予不同浓度三氧化二砷干预24小时后,HepG2细胞出现了形态及分布上的变化。C组细胞形态正常,细胞核清晰可见,细胞生长饱满、分布均匀、分叶明显,细胞生长良好;L、M、N、H组随着给药浓度增加,出现细胞分布不均、分叶消失,细胞生长差、异型性增多,细胞核消失,呈空泡状凋亡。2.MTT法检测结果显示:L组、M组、N组、H组同C组比较OD值显著减少（P<0.01）,L、M、N、H组S分别为:84%、77%、68%、63%,L、M、N、H组S同C组S比较显著下降（P<0.01）,L、M、N、H组S两两比较,L>M>N>H（P<0.05）。实验表明,三氧化二砷可显著降低肝癌HepG2细胞生存率,细胞生存率呈剂量依赖性下降,不同浓度梯度三氧化二砷作用HepG2细胞24小时,给药20μmol/L时,细胞生存率下降最为显著。3.石蜡切片免疫组化镜下观（放大200倍）:T1、T2、T3组同R组比较,微血管数量明显减少,且损毁面积增加。4.肿瘤微血管密度（MVD）:进行各组间的MVD对比,T1、T2、T3组同R组比较,MVD值均显著减少（P<0.01）,进行T1、T2、T3联合组的组间MVD对比,T1组较T2组、T3组的MVD值显著减少（P<0.01）,T2组同T3组比较,MVD值变化无明显差别（P>0.05）。实验结果表明,三氧化二砷可显著减少肿瘤内MVD,在给药后1小时MVD减少程度较给药后3小时、给药后6小时显著,而给药后3小时与给药后6小时对比,MVD变化不明显。5.肿瘤毁损面积:进行各组间的肿瘤毁损面积对比,T1、T2、T3组同R组比较,肿瘤毁损面积均显著增加（P<0.01）,进行T1、T2、T3联合组的组间肿瘤毁损面积对比,T1组较T2组、T3组的肿瘤毁损面积显著增加（P<0.01）,T2组同T3组比较,肿瘤毁损面积无明显差别（P>0.05）。实验结果表明,三氧化二砷联合射频消融可显著扩大射频消融后的肿瘤毁损面积,在三氧化二砷给药后1小时的肿瘤毁损面积显著大于给药后3小时、给药后6小时,而给药后3小时与给药后6小时对比,肿瘤毁损面积变化不明显。6.MVD与肿瘤毁损面积相关性分析:相关系数r=-0.6,显著性（双尾）P<0.01。实验表明三氧化二砷减少肿瘤内微血管密度可以使射频消融的肿瘤毁损面积增加。结论:1.三氧化二砷呈剂量依赖性降低HepG2肝癌细胞生存率;2.三氧化二砷可以减少肿瘤内微血管密度从而增加射频消融毁损的肿瘤面积,单次给药1小时协同效果最大。