由于生活方式和环境变化、生育年龄推迟等因素,男性不育的发病率不断增高,大部分不育患者无法找到明确病因,仅表现为精子质量下降,其中精子总数减少(少精子症)最容易导致男性不育。少精子症的病因目前尚不明确,研究认为生精细胞和精子凋亡可导致精子生成减少。中医认为男性不育少精子症的主要病机是肾精亏虚,补肾填精法是基本治法。基础实验和临床研究均已经证实五子衍宗丸代表的补肾填精法改善生精功能的机制之一是抑制生精细胞和精子凋亡,文献研究已表明支持细胞骨架破坏可以导致生精细胞凋亡和生精功能受损。笔者前期做过一些研究,把具有生殖毒性的雷公藤多甙与TM4支持细胞体外共培养后,发现支持细胞骨架出现断裂现象,骨架蛋白vimentin表达减少;而动物实验研究发现,五子衍宗丸对雷公藤多甙造成的生精功能损伤有改善作用。基于文献研究和前期研究,提出假设"五子衍宗丸代表的补肾填精法可以通过修复支持细胞骨架,抑制生精细胞和精子凋亡来改善生精",为了验证该假设,设计了以下临床和动物实验研究:1临床部分目的:研究以五子衍宗丸为代表的补肾填精法治疗肾精亏虚型男性不育少精子症的效果与机制。方法:因为男性不育尚缺乏有明确循证医学依据的公认治疗药物,而五子衍宗丸是疗效最被认可的药物,在临床研究中常被用作对照药物,因此本次研究未设立对照组。选择50例肾精亏虚型男性不育少精子症患者,予五子衍宗口服液治疗90天(每日2次,每次10ml),治疗前及治疗90天后分别检测精子质量(一周内连续检测2次,结果均符合少精子症的诊断标准才能入组,选择精子总数较多的检测结果进行记录),并通过Western Blot法分别检测精子凋亡。每30天进行一次随访,治疗前及每次随访时进行肾精亏虚证候评分。观察期间严格记录不良事件,同时详细记录配偶妊娠情况。结果:观察期间,4例患者配偶妊娠。76.7%的患者治疗后精子总数有明显提高。与治疗前相比,治疗后精子浓度、精子总数、精子总活力、前向运动精子百分率及a级精子百分率均有显著的提高,差异有统计学意义(P<0.05);而精液量虽有提高,但差异无统计学意义(P>0.05)。与治疗前相比,治疗后精子凋亡指标Caspase3的表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。肾精亏虚证候评分随着随访次数的增加呈下降趋势,差异有统计学意义(P<0.01),其中多数具体症状的评分也整体上呈下降趋势,差异有统计学意义(P<0.01)。分组统计显示,20～29岁组、30～39岁组和40～岁组(最大51岁)的精子总数治疗后均有提高,差异有统计学意义(P<0.05);体重正常组和过重组的精子总数治疗后均有显著提高,差异有统计学意义(P<0.01),而肥胖组的精子总数治疗前后无明显差异;小睾丸组和睾丸体积正常组的精子总数治疗后均有显著提高,差异有统计学意义(P<0.01);弱精子症组和前向运动精子百分率正常组的精子总数治疗后均有显著提高,差异有统计学意义(P<0.01)。整个观察过程中未见不良反应报告。结论:以五子衍宗丸为代表的补肾填精法能够安全有效的提高肾精亏虚型男性不育少精子症患者的精子质量,提高男性的生育能力,同时可以缓解患者的肾精亏虚症状。补肾填精法提高精子总数的机制之一可能是抑制精子凋亡。2动物实验部分目的:研究五子衍宗丸改善肾精亏虚少精子症模型大鼠精子质量的效果与机制。方法:将25只SD雄性大鼠随机平均分为空白组、模型组和五子衍宗丸低、中、高剂量组,空白组正常喂养,模型组予雷公藤多甙(20mg/kg)灌胃,五子衍宗丸三组除了予雷公藤多甙灌胃,分别予不同剂量五子衍宗丸(0.5,1.0,2.0g/kg)灌胃。30天后,取附睾组织检测大鼠精子总数、前向运动精子百分率、精子总活力等指标,Western Blot法检测睾丸组织波形蛋白(vimentin)、αα微管蛋白的表达,免疫组化法检测睾丸支持细胞中vimentin、αα微管蛋白的表达,免疫组化法和Tunel法分别检测生精细胞的PCNA表达和凋亡。结果:与模型组相比,五子衍宗丸中、高剂量组的精子总数、前向运动精子百分率、精子总活力均显著提高,差异有统计学意义(P<0.01);五子衍宗丸高剂量组睾丸组织中vimentin的表达增加,差异有统计学意义(P<0.05),五子衍宗丸低、中、高剂量组睾丸组织中αα微管蛋白的表达均增加,差异有统计学意义(P<0.05);五子衍宗丸低、中、高剂量组睾丸支持细胞中vimentin的表达均显著增加,差异有统计学意义(P<0.01),五子衍宗丸低、中、高剂量组睾丸支持细胞中αα微管蛋白的表达均显著增加,差异有统计学意义(P<0.01);五子衍宗丸低、中、高剂量组生精细胞的凋亡率均有下降,差异有统计学意义(p<0.05);五子衍宗丸低、中、高剂量组生精细胞的PCNA表达均有所提高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:五子衍宗丸可以提高肾精亏虚少精子症模型大鼠的精子质量,机制之一可能是修复支持细胞骨架蛋白,抑制生精细胞的凋亡。