实验性自身免疫性重症肌无力小鼠滤泡辅助性T细胞的表达及其与自身抗体的相关性研究

来源 :徐州医学院 徐州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xingyu2266
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目的:研究实验性重症肌无力(EAMG)小鼠体内Tfh表型(CD4+CXCR5+T)细胞群变化以及相关分子Bcl-6和IL-21的表达情况,探讨Tfh细胞在MG发病中的作用,并分析Tfh表达与自身抗体产生的相关性。  方法:1、首先建立EAMG模型。准备30只C57BL/6J小鼠,雌性,6-8周,体重18-25g,SPF级,随机分为:完全弗氏佐剂组(n=12); EAMG组(n=12);以20μg tAchR溶于100μl生理盐水(NS)中,然后与100μl等体积CFA充分混匀,制成抗原乳剂,分别于C57BL/6小鼠的双后肢足垫处以及双肩部的皮下分别注射50μl抗原乳剂,建立EAMG小鼠模型。CFA组仅注射等体积NS与CFA的混合乳剂。然后初次免疫后第30天和第60天进行重复免疫一次,每天观察EAMG/CFA小鼠临床评分的变化。免疫后第30,50,70天分别对EAMG组和CFA组小鼠进行尾静脉采血,ELISA检测血清抗AChR抗体总IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c含量以及相关分子IL-21的表达。并且进行血清抗AChR抗体总IgG与血清IL-21表达的相关性分析。2、初次免疫后90天,处死小鼠,ELISA检测血清抗AChR抗体总IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c含量以及Tfh相关分子IL-21的表达;流式检测外周血、淋巴结及脾细胞CD4+CXCR5+T细胞的比例;对脾细胞、淋巴结细胞进行磁珠分选,选出CD4+T细胞,提蛋白,Western-blot检测CD4+T细胞中Bcl-6的表达;进行外周血、淋巴结、脾脏CD4+CXCR5+T细胞比例与血清抗AChR抗体总IgG、IL-21的相关性分析。  结果:1、在整个过程中,CFA组小鼠无明显症状,临床评分一直在0.5分以下;EAMG组小鼠在免疫后第60天临床评分逐渐上升,并在第80天(疾病高峰期)与CFA组有显著差异(P<0.01);2、与CFA组相比,EAMG组小鼠血清抗AChR抗体总IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c含量在第30天时均无明显增高,第50天EAMG组小鼠血清抗AChR抗体IgG1,IgG2b含量显著增高(p<0.01),第70天EAMG组小鼠血清抗AChR抗体总IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c含量显著增高(p<0.01)。3、与CFA组相比,EAMG组小鼠血清IL-21水平在第30,50天时均无明显增高,第70天EAMG组小鼠血清IL-21水平显著增高(p<0.001)。4、第90天处死小鼠,与CFA组相比,EAMG组小鼠血清中IL-21的表达以及抗AChR抗体总IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c的含量均显著增高(p<0.01)。5、与CFA组相比,EAMG组小鼠外周血、淋巴结、脾脏CD4+CXCR5+T细胞的比例显著升高(p<0.001);6、与CFA组相比,EAMG组小鼠淋巴结、脾脏中CD4+T细胞的Bcl-6表达也显著升高(p<0.001)。7、初次免疫后第30、50天,EAMG组小鼠血清抗AChR抗体总IgG与血清IL-21的表达无相关性(r=0.430,p=0.162)(r=0.315,p=0.319),第70、90天两者呈正相关(r=0.629,p=0.029)(r=0.748,p=0.033)。第90天,脾脏CD4+CXCR5+T细胞百分比分别与IL-21、IgG的表达均呈正相关(r=0.719,p=0.045)(r=0.793,p=0.019),淋巴结CD4+CXCR5+T细胞百分比分别与IL-21、IgG的表达均呈正相关(r=0.833,p=0.010)(r=0.721,p=0.043),外周血CD4+CXCR5+T细胞百分比与IL-21呈正相关(r=0.798,p=0.018),与IgG无相关性(r=0.606,p=0.111)。  结论:1.EAMG的发病可能与血清中抗AChR抗体生成有关。2.Tfh可能Tfh可能通过促进血清中抗AChR抗体的生成,参与EAMG发病。3.IL-21及Bcl-6在Tfh的分化中可能起到重要作用。4.调控Tfh的表达可能成为MG免疫治疗靶点之一。
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