植物乳杆菌的特性分析及在鸡肠道的定殖规律研究

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植物乳杆菌(Lactobacillus Plantarum,LP)是具有遗传多样性和代谢多样性的乳杆菌属,是科学研究中广泛使用的标准菌株。LP能够产生抗菌代谢产物,如乙酸、乳酸、脂肪酸等有机酸、双乙酰、H2O2、细菌素、乳酮、乙醇和催产素等。当摄入一定量时对肉鸡肠道形态、微生物种群、营养吸收、机体抗氧化能力和免疫反应产生有益影响,从而有利于肉鸡的肠道健康、肠道免疫和生产性能。选择益生菌菌株的关键,其中包括它们对体内各种环境的耐受性及代谢有益物质的能力,LP的肠道定殖能力决定了其是否可以稳定的发挥益生功能,于是在错综复杂的肠道环境中追踪LP去向尤为重要。本文将系统的研究LP的生物学特性和代谢产物特性及其在鸡肠道的定殖规律,旨在为LP的临床应用奠定理论基础。本试验模拟动物体内胃肠道环境研究LP菌株耐酸、耐胆盐、耐人工肠液的耐受能力,通过发酵研究其生长周期,通过药敏试验与体外抑菌试验研究其拮抗能力和抗生素敏感度。研究发现,LP最适生长pH为6.5,pH1.0作用3 h存活率仍为89%,表明LP对酸有很好的耐受性;0.3%胆盐浓度作用3 h,LP的存活率为65%,在人工肠液作用2h存活率几乎没有变化;LP菌株的发酵周期为24 h,8到12 h为稳定期。50℃是LP最高耐温限度。LP对禽源金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌三种病原菌有抑制作用。上述研究结果表明,LP对胃肠道环境有良好的抗逆性能,不耐高温,发酵液和代谢产物对部分禽源致病菌有抑制作用,热杀死后依然有理想的抑菌效果。本试验基于PCR方法在LP基因组中扩增出了两种新型细菌素基因Ⅱa、KL1Y,并构建原核表达载体pET-32a-Ⅱa-KL1Y,以IPTG为诱导剂,诱导表达了含量较高的融合蛋白Ⅱa-KL1Y。研究发现,Ⅱa-KL1Y对禽源大肠杆菌、禽源沙门氏菌、禽源金黄色葡萄球菌具有高效抑制作用。另外,采用反相色谱分离原理验证了LP代谢过程中可产生甲酸、乙酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸等5种有机酸;且对于发酵4 h、8 h、12 h、16 h、20h、24 h不同时间段的代谢产生的有机酸进行验证,发现发酵前期产生的有机酸含量较高。本试验结果表明LP具有用作天然防腐剂和风味剂的潜在可能。在上述研究的基础上,采用异硫氰酸荧光素(Flourescein isothiocyanate,FITC)对LP菌株进行标记,分别进行体外粘附试验和体内定殖规律试验。结果表明,LP菌株能高密度粘附在肠道上皮细胞高或散落在细胞边缘上;LP菌株从肠道内2 h开始定殖,48h为一个周期,且在18 h达到最高值;LP菌株在鸡盲肠内可以大量生殖,在18 h达到定殖数量最高,在空回肠内定殖数量较少,在十二指肠可考虑几乎不定殖。由此对于LP菌株在肠道的定殖能力做出以下评价:盲肠>空回肠>十二指肠。进一步诠释了上述生物学特性及代谢产物的意义,将为其在临床使用提供指导性参考。本论文对LP的生物学特性、代谢产物特性及其在鸡肠道的定殖规律开展了系统研究,为LP的进一步开发利用奠定了坚实的理论基础。
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