【摘 要】
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目的①研究水蛭提取液对凝血酶诱导的人视网膜色素上皮细胞凝血酶受体-1的影响。②观察水蛭提取液对人视网膜色素上皮细胞转分化的影响。方法(1)采用消化培养法,对人视网膜色
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目的①研究水蛭提取液对凝血酶诱导的人视网膜色素上皮细胞凝血酶受体-1的影响。②观察水蛭提取液对人视网膜色素上皮细胞转分化的影响。方法(1)采用消化培养法,对人视网膜色素上皮细胞进行体外传代培养。(2)在前期实验的基础上选择0.5NIHU/ml凝血酶作为诱导浓度;选择64mg/ml浓度的水蛭提取液作为药物浓度;用免疫荧光法测定凝血酶受体-1的荧光表达,观察水蛭提取液单独或与凝血酶共同作用于人视网膜色素上皮细胞24h后,对凝血酶受体-1表达的影响。(3)选择64mg/ml水蛭提取液,作用于人视网膜色素上皮细胞24h和48h后,进行人视网膜色素上皮细胞的NSE和CK免疫染色,观察水蛭提取液对人视网膜色素上皮细胞的转分化的影响。结果(1) PAR-1的免疫荧光光密度值比较:①凝血酶组与正常对照组比较,PAR-1的IOD值下降(p＜0.01)。②单加水蛭提取液组与正常对照组比较,PAR-1的IOD值升高(p＜0.01)。③凝血酶和水蛭提取液同时加药组与凝血酶组比较,PAR-1的IOD值显著升高(p＜0.01)。表明水蛭提取液能竞争性抑制凝血酶对PAR-1的活化作用。(2) 64mg/ml水蛭提取液在作用于人RPE细胞24h和48h后,免疫组化染色均可见NSE阳性染色,并见阳性细胞有突触形成、空泡状核等神经上皮细胞形态的改变。结论(1)水蛭提取液能抑制凝血酶诱导的人RPE细胞膜上的PAR-1的活化,阻断PAR-1介导的细胞信号传导。(2)本实验结果,一定程度上证实了水蛭提取液具有诱导人RPE细胞向神经上皮细胞转化的作用。
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