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分别以与人体药物代谢密切相关的两种细胞色素酶,即CYP3A4和CYP2D6酶为靶点,以睾酮和右美沙芬作为探针底物,首次采用超高效液相色谱与三重四级杆质谱联用技术研究了土茯苓中六种主要活性成分,即表儿茶素、新落新妇苷、落新妇苷、异落新妇苷、黄杞苷和白藜芦醇与两种酶的相互作用。体外抑制实验结果表明:磷酸盐缓冲溶液pH值为7.4,孵育时间为120 min,孵育温度为30℃,睾酮和右美沙芬浓度为50μM的条件下,CYP3A4和CYP2D6的米氏常数km分别为18.9和36.4μM;最大反应速度Vm分别为0.02和0.20μM·min-1。白藜芦醇表现出强抑制CYP3A4酶作用,其次为黄杞苷、落新妇苷、异落新妇苷、表儿茶素、新落新妇苷,IC50值分别为0.44,1.32,2.63,3.03,6.13,6.51μM;新落新妇苷对CYP2D6酶抑制作用最强,其次为黄杞苷、表儿茶素、白藜芦醇、异落新妇苷、落新妇苷,IC50值分别为1.48,2.87,5.58,6.71,11.87,14.16μM。土茯苓六种活性成分对酶的抑制作用机制的研究中发现:白藜芦醇对CYP3A4酶表现出不可逆抑制作用,并且随着孵育时间和白藜芦醇的浓度的增加,表现出机制性抑制作用,但是对CYP2D6酶表现出可逆性抑制作用,为CYP2D6的反竞争型抑制剂。另外五种化合物对两种酶均表现出可逆抑制作用。研究表明:表儿茶素分别为CYP3A4和CYP2D6酶的混合型抑制剂和反竞争型抑制剂;新落新妇苷和落新妇苷分别为CYP3A4和CYP2D6酶的非竞争型抑制剂;异落新妇苷为分别为CYP3A4和CYP2D6酶的混合型抑制剂和非竞争型抑制剂;黄杞苷分别为CYP3A4和CYP2D6酶的竞争型抑制剂和混合型抑制剂。分别以土茯苓中六种活性成分为底物,研究了两种酶对六种成分的代谢消失率的影响。研究发现黄杞苷表现出对CYP3A4酶的强亲和性,为CYP3A4酶的最适合底物,Km为0.79μM,其次为新落新妇苷、表儿茶素、异落新妇苷、白藜芦醇和落新妇苷,Km分别为1.38,1.39,1.59,2.01,2.37μM;表儿茶素表现出对CYP2D6酶的强亲和性,为CYP2D6酶的最适合底物,Km为1.20μM,其次为白藜芦醇、黄杞苷、新落新妇苷、异落新妇苷和落新妇苷,Km分别为1.30,1.86,2.14,2.84,3.84μM。黄杞苷在CYP3A4酶中代谢消失率最大,Clint值为1.42 min-1.10-2,其次为表儿茶素、异落新妇苷、白藜芦醇、新落新妇苷、落新妇苷,Clint分别为1.14,0.99,0.97,0.96,0.90 min-1.10-2;黄杞苷在CYP2D6酶中代谢消失率最大,Clint值为1.07 min-1.10-2,其次为异落新妇苷、新落新妇苷、表儿茶素、落新妇苷和白藜芦醇,Clint分别为1.05,0.93,0.83,0.78,0.76 min-1.10-2。首次建立了超高效液相色谱与三重四级杆质谱联用方法,分析、测定了大鼠灌胃给予土茯苓提取物（1g/kg）后,血浆中表儿茶素、新落新妇苷、落新妇苷、异落新妇苷、黄杞苷和白藜芦醇六种药效成分的含量。柚皮素作为内标物。专属性,线性,精密度,准确度,回收率,基质效应和稳定性实验结果表明所建立的方法简单、快速,高效。该方法成功地用于分析、测定大鼠血浆中六种活性成分的最高血药浓度,达峰时间,末端消除半衰期和生物利用度等主要药动学参数,深入探讨了土茯苓六组分体内药物代谢机制。