目的： RhoA基因在多数肿瘤细胞中高表达，与肿瘤的发生发展密切相关，参与肿瘤细胞的凋亡、侵润和转移等过程。本实验通过构建RhoA基因的腺病毒RNA干扰系统，并联合TNF-α药物观察诱导肝癌细胞的凋亡情况。一方面探讨RhoA基因在肝癌细胞中的功能和作用，另一方面为肿瘤药物联合治疗提供新的研究方向。方法：在本实验室已经构建RhoAsiRNA质粒的基础上，构建RhoA腺病毒siRNA--AdsiRNA-RhoA。制备的重组腺病毒，感染HepG2细胞，通过RT-PCR和Western blot技术检测重组腺病毒对HepG2细胞中RhoA基因表达的影响。单独应用RhoA基因重组腺病毒以及联合TNF-α分别作用于HepG2后，应用MTT法检测HepG2细胞的增殖情况，TUNEL反应检测HepG2细胞的凋亡情况。结果：根据酶切鉴定和序列分析，成功构建RhoA基因的腺病毒siRNA。通过腺病毒siRNA作用，Western blot检测显示，RhoA蛋白表达抑制率为76.48%；RT-PCR结果显示，mRNA转录水平降低74.46%。表明构建的siRNA腺病毒能明显抑制RhoA基因的表达。使用RhoA基因的siRNA腺病毒并联合TNF-α，MTT实验检测结果表明能够有效抑制HepG2细胞生长和增殖；TUNEL检测结果表明能使HepG2细胞凋亡明显。结论：本研究成功建立了RhoA基因的siRNA腺病毒，以及联合细胞因子TNF-α，提高了TNF-α诱导肝癌凋亡的作用，为今后探讨RhoA基因在肝癌细胞中的功能以及肝癌的基因治疗提供了实验依据。