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实验背景：食管癌是世界第八大肿瘤,占据肿瘤导致死亡的第六位,其中绝大部分食管癌的病理类型为鳞癌,但是食管鳞癌的五年生存率只有不足15%,近年来总生存期也没有明显的延长,这跟目前缺少有效的治疗有关。随着高通量测序技术的发展,在多个食管鳞癌队列当中发现AJUBA基因突变,而相关研究是匮乏的,探索AJUBA突变在食管鳞癌发生发展中的分子机制及临床意义,可能改善患者的预后,提供新的治疗靶点。实验方法：本论文收集了五个食管鳞癌的队列,共545例患者,都有临床信息及全外显子组测序数据,通过统计学分析AJUBA突变与患者TNM分期的相关性,分别绘制AJUBA突变型与野生型患者的Kaplan-Meier曲线,通过Log-Rank比较两者是否有显著差异,以获得可能的AJUBA突变的临床意义,指导进一步的机制探索及临床应用。同时,运用293T细胞包装慢病毒,慢病毒感染目的细胞构建可供研究AJUBA突变的稳转细胞系,这包括稳定敲降的细胞系,过表达野生型AJUBA的细胞系及过表达突变型的细胞系,通过流式荧光分选、潮霉素/嘌呤霉素进行筛选,RT-PCR及蛋白印迹进行验证。在构建细胞系基础上,进行CCK-8、Transwell细胞功能实验,体外验证AJUBA突变与细胞增殖、迁移及侵袭的关系。实验结果：在545例患者当中,AJUBA突变型及野生型的TNM分期没有显著差异(Fisher确切概率p=1.000),AJUBA突变型患者Kaplan-Meier曲线有生存时间更长的趋势(Log-Rank检验p=0.13)。构建稳转敲降细胞株,感染后10日通过潮霉素/流式荧光分选进行筛选,RT-PCR及蛋白印迹验证有一定的敲降效率,但是敲降效率不高。构建过表达野生型及突变型细胞株,通过嘌呤霉素进行筛选,运用蛋白印迹技术验证,可见野生型AJUBA条带及截短的突变型AJUBA条带,构建稳转过表达细胞系成功。通过CCK-8比较过表达细胞系与野生型细胞系的增殖能力,发现三个过表达细胞系的增殖能力都强于野生型细胞系(t检验48h:p<0.001,p<0.001, p<0.001; 72h:p=0.008, p<0.001, p<0.001)。Transwell实验比较过表达细胞系与野生型细胞系的迁移及侵袭能力,三个过表达细胞系的迁移能力强于野生型细胞系(t检验：p<0.001,p<0.001,p<0.001),过表达野生型AJUBA及突变1的侵袭能力强于野生型细胞系(t检验：p<0.001,p=0.035,p=0.576),其中过表达野生型AJUBA细胞系的迁移及侵袭能力增强最为显著。结论：AJUBA突变型的食管鳞癌患者预后相对于AJUBA野生型的患者有更好的趋势。构建稳转敲降细胞系可作为进一步研究的对照,并为构建敲降后过表达突变型AJUBA的细胞系打下基础。过表达突变型细胞系可供研究AJUBA突变,作为进一步体外体内实验的基础。过表达野生型及突变型AJUBA的KYSE450细胞系具有更强的增殖能力。过表达野生型及突变型AJUBA的KYSE450细胞系具有更强的迁移和侵袭能力(除了突变2的侵袭能力),其中以过表达野生型AJUBA的细胞系增强的更为明显。