益生菌复合微生态制剂的制备工艺及免疫功能研究

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微生态制剂因其高效、无耐药性、无药物残留等优点成为抗生素的理想替代品。活菌数含量高,储存期长成为微生态制剂研究的关键。对微生态制剂研究较多的是单一菌种制剂,例如,乳酸杆菌制剂、酵母菌制剂、枯草芽孢杆菌制剂等。微生态制剂在宿主体内发挥作用是多种微生物共同作用的结果,因此本实验通过多菌株间的复合培养,研制一种复合微生态制剂。本研究得到了吉林省科学技术厅—“益生菌复合微生态添加剂制备关键技术研究”(20130206048NY)课题的资助。本实验益生菌种乳酸菌、酵母菌来源于已证明对人类具有很好生理功能的“开菲尔粒”复合菌相,与枯草芽孢杆菌复合培养,采用低温浓缩喷雾干燥技术制得一种高活力复合微生态制剂,降低生产成本,推动我国微生态制剂的产业化进程,促进微生态制剂工业化生产。通过雏鸡活性实验研究,在雏鸡日粮饲料中添加益生菌复合微生态制剂,可以提高生长性能,提高饲料利用率,增强机体免疫力。从而为新型益生菌微生态制剂的应用提供理论依据。(1)本实验制备高活力的益生菌复合微生态制剂,外界的高温、高压等环境会对益生菌产生不良影响,因此添加对菌种有保护作用的复配保护剂。研究了不同种类和浓度的脱脂乳、谷氨酸钠、海藻糖、吐温-80及甘油保护剂对微生态制剂保护效果的影响。通过单因素试验,确定了14.00%脱脂乳、4.00%海藻糖、1.50%甘油为微生态制剂保护剂最优单因素。选取脱脂乳、海藻糖和甘油三种保护剂进行复配,以微生态制剂中益生菌存活率为响应值做响应面试验,确定了复合微生态制剂保护剂的最佳配方为脱脂乳14.17%,海藻糖4.00%和甘油1.65%。在此条件下制得的微生态制剂益生菌存活率最高,可达到89.91%,其中乳酸菌数为5.60×1011cfu/g,酵母菌数为3.90×1011cfu/g,枯草芽孢杆菌数为4.20×1011cfu/g。制备的复合微生态制剂活菌总数高达1.37×1012cfu/g。(2)采用低温喷雾干燥技术制备微生态制剂,通过单因素实验和正交实验,优化喷雾干燥技术的最佳工艺参数为:出风温度为55℃、进风温度为135℃和固形物浓度为30%,在此条件下进行低温喷雾干燥处理所得益生菌微生态制剂所含活菌总数高,高达1.25×1012cfu/g,水分含量为3.60%,可以达到储存期的标准。通过在最佳喷雾干燥工艺条件下制备的微生态制剂与冷冻干燥技术制备的微生态制剂进行理化指标、感官指标及微生物指标检测,可知两种技术制备的微生态制剂都符合质量标准,因此采用低温喷雾干燥技术制备微生态制剂,可以降低成本,节约能源,从而使微生态制剂的工业化生产更具有说服力。(3)通过人工模拟机体胃肠道环境,检测复合微生态制剂对酸和胆盐的耐受性。结果表明,复合益生菌制剂,有强的耐酸和耐胆盐能力,能顺利通过胃肠道且活菌数高,能够在体内发挥有益的作用。通过储藏期实验可知,实验室制备的益生菌复合微生态制剂在6个月后活菌总数仍可达109cfu/g以上。(4)实验室制备的益生菌复合微生态制剂饲喂雏鸡,通过对雏鸡增重、料重比、免疫器官指数、ANAE+(T淋巴细胞)以及红细胞花环率等指标测定,可知益生菌复合微生态制剂对雏鸡的生长及免疫功能都起到促进作用。
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