盆腔器官脱垂(pelvic organ prolapse,POP)是由盆底的支持结构的功能障碍而引起的盆腔器官的下移,严重影响患者的身心健康。其确切发病机制尚不十分明了。近年来,关于盆底神经损伤机制的研究是众多学者关注的热点和亟待解决的难题。国内外研究证实盆腔器官脱垂、压力性尿失禁(stress urinary incontinence,SUI)的发生与盆底的神经损伤密切相关。在盆底神经损伤后的修复过程中,神经所在的局部微环境起到了决定性作用。微环境改变,势必影响盆底神经的再生修复。神经细胞粘附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)作为一种重要的神经微环境成分在神经的生长与发育、识别、聚集以及再生修复等过程中都有参与。NCAM-180亚型主要分布在成熟的神经细胞,可以抑制对生长信号的应答从而阻遏神经再生,增加细胞间的粘附作用,从而维持着神经与周围组织间的稳定性。其表达异常能导致永久性的神经损伤。神经丝蛋白(neurofilament protein,NF)是神经细胞骨架的重要的成分和神经元特异性的结构蛋白,具有“脚手架”的功能,维持神经元的正常形态和功能,促进轴突生长、延长及决定轴突直径。它的分布及结构变化反应神经元的结构及功能状况,影响神经的连接率、再生神经纤维的直径、密度及总数。目的通过研究NF、NCAM-180亚型在阴道壁中的表达情况,初步探讨它们在POP中的作用及机制,期望为POP的预防、治疗及研究提供新的路径和依据。材料与方法1材料选取本院妇科病区2013年6月至2015年2月收治的58例POP-QⅢ级及以上的非SUI患者为POP组(绝经前29例,绝经后29例),手术方式采用经阴道子宫全切术+前后壁修补术或盆底重建术。对照组39例为同期妇科非激素相关疾病、宫颈癌前病变或早期癌的非盆底功能障碍性疾病患者(绝经前17例,绝经后22例),手术方式采用经腹或经阴道子宫全切术。两组患者的一般资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。所有患者无神经系统、激素相关疾病、慢性呼吸系统、代谢性疾病以及结缔组织疾病等。近3个月未全身应用激素类药物;绝经后患者绝经年限均在2年以上。获伦理讨论小组批准,征得患者及家属同意并签字后,术中取阴道穹窿近12点方向的阴道前壁全层组织,约1.0cm×1.0cm大小。2方法采用HE染色法观察阴道前壁的组织形态学特点;免疫组织化学染色法(SP法)检测NF、NCAM-180的表达情况,蛋白质免疫印迹法(western blot WB)从分子水平检测NCAM-180的表达水平。3统计学分析利用SPSS17.0软件做统计学处理。计数资料采用c±s的形式表示。各组间比较采用两独立样本的t检验,Pearson或者Spearman相关分析NF、NCAM-180和各参数间的依存关系以及二者的相关关系。以α=0.05为检验水准。结果1各组HE染色,阴道壁病理组织形态学特征HE染色镜下(×400)显示对照组:神经纤维束的直径粗大;微血管的形态正常、结构完整;平滑肌束的直径粗大且排列整齐;胶原纤维整齐排列。POP组:固有层的结构疏松紊乱;神经纤维束萎缩、直径变细;微血管的管壁变薄且数量减少;结缔组织、平滑肌束断裂、细碎。2免疫组化染色结果在阴道前壁组织中NF、NCAM-180的阳性表达呈黄色或棕黄色;采用Leica Owin系统测定NF、NCAM-180灰度值,免疫组化染色的强弱与灰度值呈正比关系,阳性物质的表达愈高,染色愈深,灰度值愈大;反之愈小。1)NF在绝经前POP组与对照组、绝经后POP与对照组患者阴道前壁组织表达的灰度值分别为(107.94±7.58)、(167.25±8.11)、(89.83±3.16)、(142.9±4.90),各对应POP组显著低于对照组,差异均有统计学意义(t=-16.90,p=0.001;t=-28.81,p=0.001)。2)NCAM-180在绝经前POP组与对照组、绝经后POP与对照组患者阴道前壁组织表达的灰度值分别为(186.08.±14.71)、(86.78±17.29)、(141.00±12.36)、(59.91±10.13),各对应POP组显著高于对照组,差异均有统计学意义(t=13.83,p=0.001;t=16.05,p=0.001)。3)NF、NCAM-180的表达与各参数的关联分析NF的表达与年龄,绝经状态呈负相关(r=-0.353,p=0.025;r=-0.429,p=0.006);NCAM-180的表达与年龄,绝经状态呈负相关(r=-0.365,p=0.021;r=-0.403,p=0.010)。4)NCAM-180与NF间的关联分析NCAM-180与NF二者的表达呈负相关关系(r=-0.718,p=0.001)。3 Western blot结果采用Bandscan5.0软件做灰度分析,GAPDH作为内参照,分别检测NCAM-180及GAPDH的平均积分光密度,NCAM-180/GAPDH的比值代表其表达的相对水平。与对照组比较,绝经前POP组NCAM-180的表达水平增加38.71%(P<0.01);绝经后POP组的表达水平增加91.67%(P<0.01)结论POP组患者阴道壁中NCAM-180的高表达,NF的低表达,提示神经的损伤及修复障碍可能参与了POP的发生。NF、NCAM-180的表达与年龄、绝经状态呈负相关,对于老年POP患者,低雌激素水平与神经损伤对POP的影响,有待于进一步研究。