论文部分内容阅读
大鼠脚掌注射完全弗氏佐剂(CFA)是一个被广泛应用的慢性炎性痛模型。在注射CFA后,动物会迅速出现一个对热刺激或机械刺激敏感的状态,表现为伤害性热刺激引起的缩足反射潜伏期明显缩短。由CFA导致的热痛敏的高峰出现在注射后2-6小时,并持续约2周左右。新近的研究表明,胶质细胞包括小胶质细胞和星形胶质细胞的激活与外周炎症或神经损伤后产生的长时程痛敏反应密切相关。研究结果还显示,在外周炎症引起的胶质细胞激活过程,小胶质细胞的激活早于星形胶质细胞,提示小胶质细胞在长时程痛敏的起始阶段而星形胶质细胞在维持阶段发挥主要作用,即伤害性刺激引起了小胶质细胞的活化并参与诱导了痛敏反应,与此同时小胶质细胞又通过某种机制引起了星形胶质细胞的活化,从而使痛敏反应持续维持形成了长时程痛敏。大量实验已证明,外周NMDA受体的激活在慢性炎症引发的机械痛敏和热痛敏中发挥重要作用。本实验在外周注射CFA引起慢性炎症的基础上,通过痛行为观察(热辐射刺激缩足反射潜伏期)、对星形胶质细胞活化增殖的免疫组化检测(GFAP阳性表达),结合外周注射NMDA受体拮抗剂MK-801,试图证实外周NMDA受体在CFA所致的长时程痛敏及脊髓星形胶质细胞活化中的作用。实验在Sprague-Dawley雄性大鼠(100-120g)进行。实验动物分为两组(n=30),每只大鼠双侧脚掌均注射等量CFA。第一组是预先给药组,在注射CFA前15分钟预先在左侧脚掌皮下注入MK-801 (50nmol,25μl),而右侧脚掌给予等量生理盐水(NS),并且在CFA注射后的第1天、第2天、第3天、第4天分别给予原剂量的MK-801或NS。第二组是晚期给药组,在注射CFA后第4天左侧脚掌皮下注入MK-801 (50 nmol),而右侧给予等量生理盐水(NS),并重复给予相同剂量的MK-801和NS持续四天。在注射CFA后的8h、1d、4d、8d、14d各组动物随机选择六只大鼠,通过测定热辐射刺激缩足反射潜伏期进行痛反应的行为学观察,行为检测结束后处死动物进行GFAP表达的免疫组化检测,对比背角两侧星形胶质细胞的免疫组化反应,并进行图像分析和统计学处理。预实验结果显示,注射CFA侧即刻发生热痛敏,第4小时达热痛敏高峰,持续时间超过14天;而免疫组化观察显示星形胶质细胞激活发生在4天之后,并持续超过14天。在预先给药组,脚掌注射NMDA受体拮抗剂MK-801后行为学热辐射刺激缩足反射潜伏期显著延长,在第1d、4d、8d具有显著性差异,第4天的抑制幅度最大达35.72%;而免疫组化测定的GFAP阳性表达水平较单独注入CFA侧明显降低,在第4天、第8天、