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本文以华中农业大学农药实验室自行分离保藏的29株对鳞翅目(Lepidoptera)害虫有活性的苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)分离株为菌种资源,筛选对小菜蛾Plutella xylostella (L)毒力最高的Bt菌株。文章通过室内生物活性测定、培养特征鉴定、生长特征鉴定、生理生化鉴定、质粒图谱分析、SDS-PAGE分析、PCR反应鉴定及PCR-RFLP鉴定,对分离株进行了全面研究,目的在于为小菜蛾防治提供新的Bt菌种资源,并为其进一步开发利用打好理论基础。1.生物活性测定以小菜蛾3龄幼虫为试虫,对29株苏云金芽胞杆菌分离株进行初筛。在所测定的Bt分离株中,有5株对小菜蛾3龄幼虫表现出较高杀虫活性。其发酵液1000倍稀释液3d后对小菜蛾的校正死亡率均达到65%以上。对5株分离株进行复筛,筛选出了对小菜蛾有最高生物活性的分离株XF50。以标准株库斯塔克亚种HD73和工程菌WG-001为对照,比较了三者对小菜蛾和甜菜夜蛾的生物活性。实验结果表明,XF50对小菜蛾和甜菜夜蛾的生物活性均高于标准株HD73和工程菌WG-001。分离株XF50对小菜蛾和甜菜夜蛾的LC50分别为2.08×106cfu/ml和11.80×107cfu/ml。2.生长特性及生理生化鉴定分离株XF50与标准株HD73的培养及生长特征极其相似,均形成典型的菱形伴孢晶体蛋白,蛋白晶体和营养体细胞大小相当。生长延迟期都非常短,只有2h左右,2-16 h进入指数生长期,16h后进入稳定期,32h后进入衰亡期。不同培养基上菌落均呈圆形,表面或光滑或粗糙,但都无可溶性色素生成；生理生化指标鉴定与标准株HD73完全一致,均不能水解明胶；吲哚实验呈阴性；可水解淀粉、卵磷脂和脲；V.P.反应呈阳性；均不能分解D-葡萄糖、蔗糖和D-甘露醇。推断该分离株很有可能是库斯塔克亚种。3.分子特性鉴定分离株XF50与工程菌WG-001质粒图谱有明显差异,除了都能表达大小约为70Kb、23 Kb的大质粒条带外,XF50还能表达大小约为50 Kb、6.7 Kb、4.2 Kb、3.8 Kb、2.3 Kb、2.0 Kb左右的质粒条带；SDS-PAGE图谱显示XF50至少能表达大小约为135 KDa和65 KDa两条主蛋白条带；基因型鉴定结果显示筛选株XF50除含有cry2基因型外,还含有丰富的cry1类基因,即cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac, cry1B, crylI,而标准株只含cry1Ac基因；PCR-RFLP酶切图谱分析验证了PCR鉴定结果的正确性。通过双酶切鉴定出了基因cry1Aa、cry1Ac、cry1I和cry2Ab。实验结果表明：Bt分离株XF50杀虫活性高,基因类型丰富,克服了单一基因易产生抗性的缺陷。本文不仅为小菜蛾防治提供了新的菌种资源,更为工程菌的研制提供了理论基础,具有进一步开发和利用的价值。