【摘 要】
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研究目的:口腔癌为原发于舌、颊、腭、口底、牙龈等部位的恶性肿瘤,病理类型以口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）为主,约占口腔癌的九成以上。近三十年来,口腔癌的发病率逐年上升。据统计,2020年口腔癌为全球恶性肿瘤发病第16位,其中新发病例约37.7万人,死亡病例约17.7万人,而我国新发病例人数占7.97%,居全球第二。目前口腔癌的治疗多采取手术为主
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研究目的:口腔癌为原发于舌、颊、腭、口底、牙龈等部位的恶性肿瘤,病理类型以口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）为主,约占口腔癌的九成以上。近三十年来,口腔癌的发病率逐年上升。据统计,2020年口腔癌为全球恶性肿瘤发病第16位,其中新发病例约37.7万人,死亡病例约17.7万人,而我国新发病例人数占7.97%,居全球第二。目前口腔癌的治疗多采取手术为主的综合治疗,但5年生存率仍在半数左右。由于口腔鳞癌的发生是一个由正常黏膜上皮受到体内或体外环境变化刺激后出现异常增生、再发展为原位癌、再到癌变的复杂过程,受多种因素的调控,目前其确切发生发展机制尚未完全清楚,因此寻找可能的生物标志物是口腔鳞癌预防、治疗及预后预测的重要研究方向。颗粒蛋白前体（progranulin,PGRN）由GRN基因编码,在上皮细胞、神经元等细胞中均有大量表达,参与胚胎发育、骨和软骨发育、炎症反应、损伤修复、胰岛素抵抗等多种生理学过程。近期在PGRN对肿瘤的作用研究方面,大量实验表明PGRN在乳腺癌、肺癌、肝癌、结直肠癌等多种上皮性肿瘤中表达上调,且其表达水平与肿瘤的预后密切相关,可作为患者预后情况预测的指标之一;可能通过PI3K/Akt、ERK等信号通路影响肿瘤细胞的生长增殖、迁移侵袭、免疫逃逸及耐药等进展过程。而目前尚未有关于颗粒蛋白前体在口腔鳞状细胞癌中作用的研究。因此,本实验旨在通过增强或抑制颗粒蛋白前体的表达来阐明其对人口腔鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响,以从体外探究PGRN在口腔鳞状细胞癌发生发展中的作用。研究方法:1、敲减及过表达PGRN稳定转染细胞系的构建:构建包含PGRN干扰序列及包含PGRN全长序列慢病毒载体,分别对口腔鳞癌细胞CAL27、SCC15进行转染,分组为:敲减组（shPGRN）、敲减对照组（shNC）、过表达组（oePGRN）、过表达对照组（oeNC）;real-time PCR验证敲低PGRN及过表达PGRN的效果。2、敲减及过表达PGRN对细胞增殖、迁移、侵袭的影响:通过CCK-8法及平板克隆形成实验检测敲减及过表达PGRN对细胞生长及增殖的影响;通过Transwell迁移实验及划痕实验确定敲减及过表达PGRN对细胞迁移的影响;通过Transwell基底膜侵袭实验确定敲减及过表达PGRN对细胞侵袭的影响。3、利用免疫组化方法检测12例口腔鳞癌患者癌及癌旁组织中PGRN的表达情况是否存在差异。结果:1、免疫组织化学结果显示PGRN在口腔鳞癌中较癌旁表达上调。2、通过real-time PCR从基因水平验证构建成功敲减及过表达PGRN的口腔鳞癌细胞系,并筛选出干扰序列LV-GRN-RNAi21856-1、LV-GRN-RNAi21857-1效果更佳,慢病毒转染时最佳感染复数（MOI）为5。3、在口腔鳞癌细胞系CAL27、SCC15中敲低PGRN后,与对照组相比生长明显减慢,克隆形成实验显示集落形成减少。迁移实验表明细胞迁移能力明显下降。Transwell实验表明能穿过小室及基质胶的细胞数明显减少。4、在口腔鳞癌细胞系CAL27、SCC15中过表达PGRN后,与对照组相比生长明显增快,克隆形成实验显示集落形成增多。迁移实验表明细胞迁移能力明显上升。Transwell实验表明能穿过小室及基质胶的细胞数明显增多。结论:PGRN可增强口腔鳞癌细胞（CAL27、SCC15）的生长增殖、迁移和侵袭能力,对口腔鳞癌的发生发展起促进作用。
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