【摘 要】
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目的:三七总皂苷(Panax Notoginseng Saponins,PNS)是中草药三七的主要化学成分,具有抑制血小板聚集、降低血管阻力、改善微循环、抑制炎症因子和抗氧化应激的作用,在治疗神经系统疾病和心脑血管疾病中具有广泛的药理活性,最近由于其潜在的抗癌活性和低毒性受到了极大的关注,成为抗肿瘤替代药的研究热点。有研究已经证明PNS对乳腺癌、结直肠癌、非小细胞肺癌和宫颈癌等多种癌症具有显著的抗
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目的:三七总皂苷(Panax Notoginseng Saponins,PNS)是中草药三七的主要化学成分,具有抑制血小板聚集、降低血管阻力、改善微循环、抑制炎症因子和抗氧化应激的作用,在治疗神经系统疾病和心脑血管疾病中具有广泛的药理活性,最近由于其潜在的抗癌活性和低毒性受到了极大的关注,成为抗肿瘤替代药的研究热点。有研究已经证明PNS对乳腺癌、结直肠癌、非小细胞肺癌和宫颈癌等多种癌症具有显著的抗癌作用,但是PNS在胰腺癌中的作用还鲜有报道。本研究中我们联合PNS和吉西他滨(Gemcitabine,Gem)作用于胰腺癌细胞,观察胰腺癌细胞的表型变化,旨在研究PNS对胰腺癌细胞是否具有抗癌作用以及可能的作用机制。方法:人胰腺癌Miapaca2和PANC-1细胞培养;分别用不同药物浓度梯度的PNS和Gem处理Miapaca2和PANC-1细胞,CCK-8法检测Miapaca2和PANC-1细胞的活力,分别计算出PNS和Gem处理胰腺癌细胞的IC50值,根据CCK-8实验结果确定后续实验中加入PNS和Gem的药物浓度以及干预时间;将胰腺癌细胞分成4组:Control组、PNS组、Gem组和PNS+Gem组,Control组中加入等量的PBS;平板克隆实验和Ed U细胞增殖实验检测胰腺癌细胞的增殖;伤口愈合实验和Transwell实验分别检测胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力;流式细胞术检测胰腺癌细胞的凋亡率;蛋白免疫印迹(Western Blot)定量分析侵袭转移、凋亡及自噬相关蛋白MMP2、MMP9、cleaved-caspase3、Bax、Bcl-2、LC3B-I、LC3BII和p62的表达水平。结果:PNS能够以剂量和时间依赖的方式抑制胰腺癌Miapaca2和PANC-1细胞的活力,并且Miapaca2细胞系对PNS更加敏感。平板克隆实验PNS组中Miapaca2和PANC-1细胞集落的形成都受到了显著的抑制,并且与Gem组相比,PNS+Gem组的抑制效果更加明显;在Ed U细胞增殖实验中我们也得到了相同的趋势,证实PNS能抑制胰腺癌细胞的增殖,并且提高了胰腺癌细胞对Gem的化学敏感性。伤口愈合实验和Transwell实验结果显示PNS组中胰腺癌Miapaca2和PANC-1细胞的转移和侵袭性都受到了显著抑制;流式细胞术实验结果表明PNS增加了胰腺癌Miapaca2和PANC-1细胞的细胞凋亡率;Western blot检测发现PNS组中与细胞迁移和侵袭密切相关的MMP2和MMP9蛋白以及抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白cleaved-caspase3和Bax表达增高。此外,经PNS处理的胰腺癌Miapaca2和PANC-1细胞自噬相关蛋白LC3B-II/LC3B-I的比值降低,p62蛋白的表达增高。结论:PNS可以有效抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,这可能是通过抑制胰腺癌细胞自噬和诱导胰腺癌细胞凋亡途径实现的;PNS和Gem联合作用于胰腺癌细胞时有更强的抗癌效果,证明PNS能增加胰腺癌细胞对Gem的化学敏感性。
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