维生素B9在生理条件下是一种亲水性的小分子的还原形式(分子量约500),其功能是作为一碳转移反应(包括核苷酸的从头合成)中的辅因子,并在涉及DNA和RNA的合成及后续过程,细胞增殖和存活等诸多代谢过程中起着关键作用。这种维生素的主要循环形式是5-甲基四氢叶酸,血清浓度介于5-30 nM。大量体内和体外研究表明叶酸缺乏对DNA复制和修复和基因表达有重大影响,同时也是一些病理情况,比如胎儿神经发育障碍和心血管疾病的病因。正常生理PH条件下叶酸的亲水性和带负电荷妨碍其通过质膜的被动转运。细胞摄取叶酸至少由3种不同的转运体介导。其中,还原形式的叶酸载体(RFC,因其不能结合非生理条件下氧化形式的维生素即叶酸而命名)是主要的叶酸转运体,其表达遍及不同的发育阶段和正常成体组织中,虽然不同的组织表达水平有明显差异。RFC是一种跨膜的阴离子交换器,其对5-甲基四氢叶酸的解离常数在mM范围内,尽管在叶酸的生理浓度范围下RFC并不能最佳运转,但这种转运体能逐渐适应并迅速补充细胞的辅酶库。最近报道存在一种质子偶联的高亲和力叶酸转运体,被证明是低PH环境下叶酸的主要转运体,并且似乎是肠道吸收叶酸的主要转运体。第三种叶酸转运体,称为叶酸受体(FR),通常指的是高亲和力叶酸结合蛋白。FR是Mr介于38,000-45,000的糖多肽家族成员。受体以高亲和力(Kd约0.1-1nM)结合叶酸、还原形式叶酸、多种叶酸拮抗剂以及叶酸结合物。FR亚型中的一种被证明在限制饮食中叶酸的条件下对于小鼠胚胎中正常的神经管发育和生长是必需的。然而FR在成体组织的生理功能仍然未知,除了因为FR组织分布范围窄,还因为它主要表达在极化上皮细胞的顶部(腔面),而那里不会接触循环中的叶酸。而且表达在成熟造血细胞上的FR却不能结合叶酸。对人类基因组进行同源性搜索得到4个不同的FR基因,称为FRs-α,-β,-γ和-δ,还有几个假基因。FR-γ基因的多态性是由于突变造成了蛋白的C末端的截断,突变的蛋白指的是FR-γ’。编码FRs-α,-β,-γ的基因位于11号染色体(q11.3-q13.5)。编码FR-δ的基因位于11q14,预测编码一个27.7KDa大小的蛋白质。FR-α和-β是膜相关蛋白,而FR-γ和FR-γ’由于缺乏供GPI锚定附着的信号而组成性地被分泌。FR-α表达在正常成体组织极化上皮细胞的腔面,包括肾小管基底部,肺内I型和II型肺泡上皮,脉络从,卵巢,输卵管,子宫,附睾,下颌唾液腺,支气管淋巴结,胎盘的滋养层以及视网膜色素上皮细胞基底膜。FR-β表达在正常骨髓细胞生成晚期以及胎盘,脾和胸腺中,也表达在慢性粒细胞性白血病(CML)、急性粒细胞性白血病(AML)的白血病原始细胞中。FR-γ表达在正常和恶性造血细胞中,包括脾,骨髓,胸腺,以及卵巢癌,宫颈癌和子宫癌。鼠类FR亚型在文献中称为FR1, 2和3,经常被认为分别对应于人类的FRs-α,-β和-γ。通过基因数据库搜索的方法发现第三种小鼠叶酸受体- FR4,并发现FR4主要表达于脾脏和胸腺,进一步的研究发现FR4主要表达于脾淋巴细胞、成熟胸腺细胞,特别是T淋巴细胞表达FR4而不是FR1和FR2的mRNA和蛋白质,进而发现天然调节性T细胞(natural Treg)组成性高表达FR4。但是,到底FR4是分泌性蛋白还是锚定在细胞膜上仍然不清楚。我们在克隆小鼠脾细胞FR4的CDS区时发现FR4存在一种新的变异体,命名为FR4v,其CDS区全长大小为843bp,并且含有一个108bp的完整的内含子成分。Western blot分析表明FR4v存在不同于FR4的相应蛋白,大小介于31-38kDa。我们通过用PI-PLC处理小鼠脾细胞后进行western blot和流式分析,第一次证实FR4变异体主要是通过GPI锚定在细胞表面的膜相关蛋白。我们利用FACS分选出小鼠脾细胞中高纯度的CD8+,CD4+CD25-,CD4+CD25+ T细胞,western blot检测表明,FR4v组成性表达在CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)中。综上所述,我们确认并鉴定了一种通过选择性剪切,保留内含子而产生的新型FR4变异体,其编码蛋白FR4v通过GPI锚定在细胞表面,并且组成性表达在Treg上,推测可能与Treg细胞的低反应状态有关。