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T细胞在鱼类细胞免疫及抗感染过程中起着重要作用，CD3分子是仅存在于T淋巴细胞的一种膜表面抗原，与T细胞抗原受体（TCR）相连，参与T淋巴细胞的信号转导，可用于标记T淋巴细胞、胸腺细胞等。根据抗体可与抗原特异性结合的特性，通过制备CD3分子抗体，则可用其对鱼体组织中T淋巴细胞进行研究。论文根据已公布的牙鲆CD3ε基因序列重组表达了牙鲆CD3，并制备了可特异性识别T细胞的抗CD3多克隆抗体（多抗），利用该多抗研究了牙鲆T细胞的组织分布及注射灭活爱德华氏菌后的数量变化。本文为深入研究T细胞在鱼类免疫系统中的作用，理解鱼类细胞免疫应答机制奠定了基础。具体研究结果如下：本文根据牙鲆CD3ε基因序列设计特异性引物，通过PCR扩增、产物纯化获得了CD3ε基因；将CD3基因片段与表达载体pET-30a质粒连接，并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达，SDS-PAGE电泳分析表明，表达蛋白的相对分子质量约为27kDa（包含7kDa的标签蛋白），质谱鉴定确认为牙鲆CD3蛋白。亲和层析法纯化重组表达蛋白，用其免疫Balb/c小鼠制备鼠抗CD3多克隆抗体。利用该多抗与牙鲆白细胞进行免疫共沉淀，发现它可以特异性识别一个20kDa的蛋白，质谱分析鉴定为牙鲆CD3。利用抗CD3多抗和抗IgM单克隆抗体对牙鲆白细胞进行间接免疫荧光共染色，发现了CD3+/IgM-、CD3-/IgM+和CD3-/IgM-三种白细胞，且CD3+白细胞与IgM+白细胞无交叉，表明抗牙鲆CD3多抗能够特异性识别T淋巴细胞，与抗IgM单克隆抗体标记的B淋巴细胞无交叉反应。利用抗CD3多抗对牙鲆外周血白细胞、鳃、表皮、胃、肠、脾、头肾、体肾、肝脏、心脏及性腺进行免疫组织化学染色，结果显示在牙鲆的外周血白细胞、鳃上皮、表皮、胃黏膜固有层及胃腺、肠上皮、脾表面浆膜及白髓中、头肾表面结缔组织被膜及头肾组织内、体肾的肾小管上皮、肝脏及心脏中观察到红色阳性信号，而在性腺及阴性对照中未观察到阳性信号。利用抗CD3多抗为探针，流式细胞术测定注射灭活爱德华氏菌前后牙鲆外周血、脾和头肾白细胞中T细胞数量的变化，发现均呈现先升高后降低的趋势，且都在第5天达到最高值，分别为外周血12.6%、脾9.7%、前肾8.7%。