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猪萎缩性鼻炎(Atrophic Rhinitis, AR)是由产毒素多杀性巴氏杆菌(Toxigenic Pasteurella multocida, T+Pm)单独或与支气管败血波氏杆菌Ⅰ相菌(Bordetella bronchiseptica I, Bb-I)共同感染而引起的一种严重的、广泛流行的猪呼吸道传染病。猪萎缩性鼻炎根据其病原、发病特点和危害程度可分为猪进行性萎缩性鼻炎(Progressive atrophic rhinitis, PAR)和猪非进行性萎缩性鼻炎(Non-progressive atrophic rhinitis, NPAR)两种。PAR的主要病原是T+Pm,它能分泌一种由ToxA基因编码的多杀性巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin, PMT)。PAR能导致猪鼻甲骨发生不可逆的萎缩变形,饲料转化率降低,猪只生长速度下降,同时易引起其他呼吸道病原的继发感染,给世界各地的养猪业造成了巨大的经济损失。本研究利用本实验室建立的巢式PCR方法和间接ELISA方法,通过优化,组装成为试剂盒,利用试剂盒对湖北地区规模化猪场开展猪萎缩性鼻炎的病原和血清流行病学调查,根据调查结果,对其中一个规模化猪场开展猪进行性萎缩性鼻炎的净化研究。主要研究内容如下：1.猪进行性萎缩性鼻炎病原和血清检测方法的研究在实验室已经建立的巢式PCR检测猪鼻拭子样品中产毒素多杀性巴氏杆菌方法的基础上进行了试剂盒的研究,通过优化确定了巢式PCR的反应体系、Taq DNA聚合酶、引物、dNTPs的最佳使用浓度等参数；开展了巢式PCR方法的特异性、可重复性、敏感性和符合率试验,能检测出17CFU的菌量,与其它检测方法符合率达100%。利用实验室已经构建PET-28b-C2115/BL21菌,进行低温诱导表达纯化；纯化后的重组蛋白包被ELISA酶联板,进行试剂盒的研究,通过优化确定最佳抗原包被浓度和血清稀释度、阴阳界限值；对ELISA试剂盒的特异性,可重复性以及保质期进行研究。结果显示：最佳抗原包被浓度为1：800,最佳血清稀释度为1：40,阴阳界限值为0.385,试剂盒的特异性和可重复性变异系数在10%以下,保质期为6个月。2.规模化猪场猪萎缩性鼻炎病原和血清流行病学调查研究对湖北地区规模化猪场分别采集鼻拭子样品和血清样品进行猪萎缩性鼻炎病原和血清流行病学调查。结果显示：8个规模化猪场采集的1627份鼻拭子样品中,检出阳性样品18份,阳性检出率为1.1%(18/1627),阳性鼻拭子样品主要分布于3个规模化猪场,猪场阳性率为37.5%(3/8)；20个规模化猪场采集的2302份血清样品中,检出阳性1101份,阳性检出率为47.8%(1101/2302),20个猪场血清样品中均可检出阳性,各场阳性率为8.3%～81.5%。3.规模化猪场猪进行性萎缩性鼻炎净化研究依据流行病学调查结果,确定在湖北B场开展猪进行性萎缩性鼻炎的净化研究。首先针对该场所有经产母猪,种公猪和后备母猪采集鼻拭子样品,同时对该场35日龄猪、56日龄猪和100日龄猪分别采集30、20和20份鼻拭子样品,通过巢式PCR对鼻拭子样品进行检测；对检出阳性猪立即进行淘汰净化,在采取净化措施3个月和6个月后,分别按照一定比例采集鼻试子样品进行抽检,评价净化效果。结果显示：B猪场采集895鼻拭子样品中,检出阳性样品8份,阳性检出率为0.9%(8/895)；采取净化措施后,两次抽检阳性检出率都为O。