流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）是虫媒病毒的重要成员,属于黄病毒科（Flaviviridae）黄病毒属（Flavivirus）,是流行性乙型脑炎的致病原。JEV主要流行于亚洲太平洋地区,影响人口高达30亿。虽然疫苗的使用大大降低了流行性乙型脑炎的发病率,全球每年仍有67000例乙型脑炎发生。该病致死率高达30%,且多数幸存者会伴随有严重的神经性疾病,对人们的生命及健康造成了重大的威胁。目前而言,临床上仍然没有能够治疗该病症的药物及特殊的治疗方法。因此对于抗病毒药物的筛选及研发显得尤为重要。报告病毒是指带有报告基因标记的病毒粒子,通过报告基因的表达来反映病毒在机体内的复制及扩散情况。报告病毒具有完整的感染性病毒粒子,与野生型病毒具有相似的理化性质,因此可用于筛选针对病毒整个生命周期的抗病毒药物。病毒的生长情况可以通过检测报告基因的表达水平而反映,因此与传统的方法相比更加方便、快捷。此外报告病毒还可用于活体成像观察病毒在小鼠体内的生长及扩散情况,对于研究病毒的致病机制、药物的评价等方面具有重要的作用。本研究中,我们通过融合PCR的方法将eGFP基因插入到病毒基因组的5’UTR及Capsid之间,构建成基因组带有eGFP标记的JEV-eGFP报告病毒的全长感染性克隆。将其体外转录的RNA转染入敏感细胞后成功拯救出能够在细胞中复制和扩散的JEV-eGFP报告病毒。对JEV-eGFP的生长特性及稳定性进行研究发现,该报告病毒的生长趋势基本上与野生型类似,能够在细胞中稳定传4代。药物抑制实验结果表明,JEV-eGFP报告病毒与JEV-WT的药物抑制曲线类似,EC₅₀相近。证明JEV-eGFP报告病毒能够用于抗病毒药物筛选且能够通过观察eGFP的荧光强度及表达eGFP的阳性细胞数的变化来表征药物对病毒的抑制效果。为建立针对病毒整个生命周期药物的高通量筛选方法,我们利用JEV-eGFP构建了高内涵抗病毒药物筛选平台,并对FDA批准的药物库进行了抗JEV病毒的高内涵筛选。该药物库含有1443种抗病毒化合物,均已是能够在临床上使用的药物,如果筛选出可用的药物能够大大缩短新药研发到临床的时间和金钱。通过初次筛选及再次验证,我们共从FDA药物库1443种化合物中筛选出一些对JEV有潜在抑制的药物。其中有6种药物已被相关研究证明对野生型病毒有潜在的抗病毒效果。进一步证明了我们构建的筛选系统的可靠性。对另外新发现的几种药物的抗病毒效果进行评价,发现均可对JEV病毒产生明显抑制,表现出较好的抗病毒效果。以上结果证明了我们所构建的报告病毒及高内涵抗病毒药物筛选平台能够很好的应用于JEV的抗病毒药物筛选。对于药物的筛选及后续的研究具有重要的作用。