抗柑橘脚腐病砧木资源、杀菌剂的筛选及寄生疫霉RXLR效应蛋白的预测

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柑橘脚腐病(Foot rot of citrus)又名裙腐病、烂蔸疤,是危害柑橘主干基部的土传性病害,在我国各柑橘产区均有发生。脚腐病感病初期病部树皮呈不规则的湿腐状,颜色变褐常流出褐色胶液,具酒糟气味,病害扩展至木质部,使木质部变色腐烂,病健交界明显,发病后期树皮干裂脱落,木质部外露。多数报道认为脚腐病是由寄生疫霉、柑橘褐腐疫霉和辣椒疫霉等疫霉属致病菌引起的,有少量报道则认为是由镰刀菌引起的。选用抗脚腐病资源作砧木是防治脚腐病最经济有效的措施,生产上常用枳、香橙、黎檬、枸头橙等作为砧木。防治脚腐病常用方法有选用抗病资源做砧木、加强田间栽培管理、药剂防控、利用抗病砧木靠接换砧等。抗柑橘脚腐病种质资源筛选试验中,首先对脚腐病的致病菌进行分离。采用常规组织分离法分离脚腐病发病组织中的病原菌,利用核糖体DNA通用引物ITS1与ITS4扩增CTAB法提取的病原菌DNA,将扩增产物测序后在NCBI网站进行同源性比对,根据比对结果确定分离出病原菌的种类。采用未完全成熟的叶片接种寄生疫霉菌丝块的方法对103种柑橘种质资源进行抗病筛选,依照病原菌侵染叶片7d后病斑直径的平方为指标,将砧木资源分为高抗(HR)、抗病(R)、中抗(MR)、中感(MS)、感病(S)、高感(HS)六级。结果表明,除传统抗脚腐病砧木资源枳、枳橙、酸橙以外,还发现罗汉橙、早花枳、黎檬类、香橙类等为高抗病资源,柚类中古老钱沙田柚、晚白柚、五步红心柚等鉴定为感病资源,柠檬、巴柑檬、甜橙、枸橼类中多数为感病资源。药剂防治试验中采用菌丝生长速率法对寄生疫霉(Phytophthora parasitica)进行了21种杀菌剂室内毒力筛选。研究发现,各药剂在不同浓度梯度下,对寄生疫霉菌丝的生长均有抑制作用,并且其抑制率与药剂浓度呈正相关。运用DPS软件对数据进行统计处理,得到各药剂对寄生疫霉的毒力回归方程、抑制中浓度(EC50)及相关系数(R),数据显示各药剂抑菌作用最强的是烯酰吗啉,其次是唑醚-代森联、春雷霉素、丙森锌和多抗霉素,这些药剂可尝试在生产中防治脚腐病。试验中利用生物信息学分析,发现在寄生疫霉蛋白质序列中约存在248个含有信号肽且其下游具有RXLR结构域的候选效应分子,效应蛋白的预测为无毒基因与抗病基因的互作机理研究和植物抗(感)病的分子机理奠定基础。
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