乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase， ADH）通常以NAD^＋、NADP^＋或PQQ为辅酶，是一类氧化还原酶。本研究在筛选ADH高产菌株的基础上，对菌株的发酵条件、ADH提取纯化和酶学性质进行研究，主要研究结果如下：1. ADH高产菌株的筛选。利用产酸显示平板、水解碳酸钙透明圈法和以乙醇为唯一的碳源等筛选模型，筛选出一株ADH产量为4995U/mg，经形态学、生理生化试验、16S rDNA序列分析，鉴定为葡糖醋杆菌，命名为Gluconacetobacter sp. TDY1。2.菌株TDY1生长和产酶条件研究。单因素试验得出优化培养基为1.5%葡萄糖、2.0%复合氮源（酵母膏+牛肉膏）、0.4%氯化钙和0.4%有机酸；菌株生长的培养最佳条件为初始pH6.0、接种量8%、装液量30mL/300mL、25℃条件下培养20h。经Box-Behnken设计优化菌株产酶条件为葡萄糖1.54%、复合氮源2.02%、装液量48.70mL和乳酸0.42%，菌株TDY1酶活达7191U/mg。3.菌株TDY1胞内ADH的提取纯化。分别用超声破碎法、反复冻融法、溶菌酶法和细菌裂解液法等4种不同破壁方法对菌株TDY1进行破壁处理，通过比较细胞的破碎率和ADH的活力，确定适合于菌株TDY1的细胞破壁方法和最佳条件。实验结果表明超声破碎法获得的ADH活力为4004U/mg，破壁率为97.3%，与其他3种方法比较差异极显著（P＜0.01）。使用正交设计对超声破碎法的破壁条件进行优化，超声破碎的最佳条件为：超声9s、间隔18s、破碎总时间75s、功率95W。菌株TDY1中ADH经超声破碎法、硫酸铵盐析沉淀、透析和DEAE-52阴离子交换层析处理后，纯化倍数8.7倍，酶活回收率为38.7％。纯化后的ADH，经SDS-PAGE初步确定其亚基分子量为48KDa。4. ADH的部分酶学性质研究。菌株TDY1的ADH最适氧化反应pH9.0，pH稳定范围8-9；最适反应温度70℃，在10-60℃温度范围酶活稳定。最适底物为正丁醇，不同金属离子对NAD⁺-ADH活性的影响存在较大差异，其中Mn²⁺对酶活有促进作用；Fe³⁺对酶活无促进或抑制作用；K⁺、Na⁺、Mg²⁺等金属离子对酶活有不同程度的抑制作用；Ba²⁺离子使ADH完全丧失活性。