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目的对前期基因芯片技术筛选出的艾滋病脾肾阳虚证潜在mRNA表达进行临床验证,以确定艾滋病脾肾阳虚证特异性mRNA表达,为艾滋病中医证候诊断提供客观化依据。方法本研究选取前期基因芯片筛选结果中艾滋病期脾肾阳虚证与正常对照组比较具有显著差异的目的mRNA10条,分别为:MAP2K7、IFIT1、MAPK14、NLRP6、DOCK4、ABCC2、CXCL9、TBXA2R、STYK1、KIR2DL4,采用实时荧光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)技术对纳入的艾滋病期脾肾阳虚证患者、无症状期脾肾阳虚证患者和健康志愿者的标本进行上述10条目的mRNA表达量的检测,以GAPDH作为内参基因进行对比,目的mRNA的相对表达量用2-ΔCT值来表示。通过SPSS V20.0统计软件分析目的mRNA在艾滋病期、无症状期脾肾阳虚证组与正常对照组之间的差异表达,以及艾滋病期脾肾阳虚证组及无症状期脾肾阳虚证组之间目的mRNA差异表达。结果1.艾滋病期脾肾阳虚证组与正常对照组比较:NLRP6在艾滋病期脾肾阳虚证组表达下调,差异有统计学意义(P<0.05),与芯片筛选结果一致;MA P2K7、KIR2DL4在艾滋病期脾肾阳虚证组表达上调,差异有统计学意义(P<0.05),与芯片筛选结果相一致;TBXA2R在艾滋病期脾肾阳虚证组表达上调,与芯片筛选结果一致,但差异无统计学意义(P>0.05);CXCL9在艾滋病期脾肾阳虚证组表达上调,与芯片筛选结果不一致,但差异有统计学意义(P<0.05);ABCC2在艾滋病期脾肾阳虚证组表达下调,与芯片筛选结果一致,但差异无统计学意义(P>0.05)。IFIT1、D0CK4、STYK1、MAPK14这4条mRNA在艾滋病期脾肾阳虚证组表达上调与基因芯片筛选结果表达下调不相吻合,且差异无统计学意义(P>0.05)。2.无症状期脾肾阳虚证组与正常对照组比较:NLRP6、ABCC2在无症状期脾肾阳虚组表达下调,差异有统计学意义(P<0.05),与芯片筛选结果一致。MAP2K7、KIR2DL4在无症状期脾肾阳虚证组表达上调,差异有统计学意义(P<0.05),与芯片筛选结果一致;TBXA2R在无症状期脾肾阳虚证组表达上调,与芯片筛选结果一致,但差异无统计学意义(P>0.05)。CXCL9在无症状期脾肾阳虚证组表达上调,与基因芯片筛选结果不一致,但差异有统计学意义(P<0.05);D0CK4、MAPK14、STYK1、IFIT1 这 4 条 mRNA 在无症状期脾肾阳虚证组表达上调与基因芯片筛选结果表达下调不相吻合,且差异无统计学意义(P>0.05)。3.艾滋病期脾肾阳虚证组和无症状期脾肾阳虚证组比较:MAP2K7的表达在两组之间差异有统计学意义(P<0.05),其余9条mRNA的表达在两组之间无统计学意义(P>0.05)。结论1.本研究得出艾滋病脾肾阳虚证的特异性mRNA为KIR2DL4、NLRP6、MAP2K7,其中MAP2K7可以作为无症状期向艾滋病期进展的特异性表达mRNA。上述mRNA可能通过NK细胞、NF-κ B信号通路、MAPK信号通路等调节炎症反应、免疫反应、细胞凋亡等。2.艾滋病无症状期脾肾阳虚证的特异性mRNA为ABCC2。ABCC2可能通过参与LTB4、INF-γ和TNF-α等炎症信号分子的转运来介导免疫反应的发生。