鸡痘病毒地方分离株的鉴定及致病性研究

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鸡痘是危害养鸡业发展的一种重要传染病,发病后成鸡一般不造成死亡,雏鸡死亡率较高,5%-30%不等,黏膜型鸡痘症状较严重,有时可引起较高的死亡率。鸡痘可使病禽生长迟缓,产蛋下降,种禽发病时孵化率降低,若并发其他传染病、寄生虫病和卫生条件、营养状况不良时也可引起大批死亡,死亡率甚至高达40%~50%。目前,世界各国对鸡痘的预防主要是接种鸡痘或鸽痘病毒弱毒活疫苗,在很大程度上降低了鸡痘的发生率。但近些年来,鸡痘的发生率又有增高的趋势,并且症状也比以前的严重,免疫失败的情况也很常见。为了探讨鸡痘病毒是否发生了变异,同时建立比传统的血清学方法更敏感、特异的分子生物学检测方法,我们进行了鸡痘病毒分子遗传学分析及PCR诊断方法的研究。本试验对临床疑似鸡痘的患鸡,进行了病毒的分离、提纯、鉴定、序列分析,建立了对鸡痘病毒的PCR检测方法,并进行了初步应用。本试验首先对5例疑为皮肤型鸡痘的病鸡进行了取样及病毒的分离与鉴定。利用10日龄鸡胚尿囊膜连续传代3次,经病毒分离、病毒致病变效应(CPE)、琼脂扩散反应等,证明所分离的病毒是鸡痘病毒,命名为FPVSD1~5。根据已经发表的鸡痘病毒的C型血凝素基因序列,自行设计引物,FPVSD1~5分离株通过PCR分别扩增出了预期的647bp片段,经过测序、序列比较分析对该基因序列的变异性研究表明:该序列与已经发表的鸡痘基因序列同源性高达100%,没有发生基因变异。又根据鸡痘病毒Hypothetical protein基因序列,设计另外一对引物,通过PCR扩增出了预期的704bp片段,经过测序、序列比较分析对该基因序列的变异性研究表明:该序列与已经发表的鸡痘基因序列同源性高达100%,也没有发生基因变异。再次证明鸡痘病毒基因组保守性较高。利用分离的地方株鸡痘病毒对SPF雏鸡和商品代蛋公雏鸡进行了攻毒实验,结果表明:实验鸡群并未发生严重的鸡痘症状和病理变化。上述实验建立的PCR方法,同时可用于鸡痘病毒的分子生物学诊断。
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