白三叶（Trifolium repens L.）为豆科（Leguminosae）三叶草属，多年生草本植物，是一种优质的草坪草、绿肥、牧草兼用型草种，在景观建坪中被广泛应用。目前白三叶育种中普遍存在的问题是种质资源匮乏，形态单一，改变这种现状最基本、有效的途径之一是应用诱变育种等常规育种和分子育种相结合的方法，即人工诱导产生突变，在经过筛选鉴定，培育丰富、优质及综合性状优良的新种质。本试验通过不同时间、不同浓度梯度EMS和秋水仙素处理白三叶种子，确定EMS和秋水仙素处理白三叶瑞文德种子的适宜诱变剂量，利用适宜处理时间浓度对白三叶种子进行诱变处理，通过形态学结合SSR分子标记技术，从诱变群体中筛选、鉴定出各类突变类型；对部分突变进行分子检测和遗传差异分析，比较EMS和秋水仙素对白三叶诱变效果的差异，加快变异植株的筛选速度，缩短育种年限，为白三叶的诱变后代的遗传变异奠定一定的基础，在培育适合园林绿化的白三叶新品种的工作中具有十分重要的意义。研究的结果主要如下：（1）利用0、0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%、1.1%、1.3%的EMS溶液及浓度为0、0.05%、0.1%、0.2%、0.3%、0.5%、0.7%、1.0%的秋水仙素溶液各对100粒种子进行预处理，15d后统计发芽结果。化学诱变抑制种子的萌发，但随着时间的推移，抑制作用减弱，EMS0.3%和秋水仙素0.05%以下浓度诱变剂对种子的发芽率基本没有影响，EMS0.3%和秋水仙素0.05%以上随剂量加大，发芽率降低，且确定EMS和秋水仙素诱变白三叶种子的半致死浓度分别为0.7%和0.3%。（2）各利用3个时间（EMS4h、8h、16h；秋水仙素12h、24h、48h）和3个浓度梯度（EMS0.5%、0.7%、0.9%；秋水仙素0.1%、0.3%、0.5%）以及两组对照共20个组合处理白三叶种子，每组合各处理约5000粒种子，以幼苗致死率、突变频率为选择标准，确定了EMS4h与0.7%、8h与0.7%，0.9%为适宜白三叶诱变组合；秋水仙素12h与0.5%、24h与0.3%，0.5%为适宜白三叶诱变组合。（3）截止到实验期，根据表现型差异，共发现39株形态突变，其中EMS诱导变异株数18株，变异频率为0.040%，秋水仙素诱导变异植株21株，变异频率为0.047%。获得的突变类型可归类为根系、高度、叶形、叶色、气孔突变等7种，不同突变类型的突变频率各不相同。（4）对部分突变植株进行SSR检测，20份白三叶突变体材料SSR扩增，共扩增出295条带，其中多态性条带273条，多态性百分率为92.1%。特有性条带4条，占4.9%。（5）UPGMA聚类分析显示，在相似系数为0.582处，20份白三叶突变体明确的聚成3组：第一组为样本1（EMS0.7%处理4h），第二组为样本2~9，第三组为样本10（秋水仙素0.5%12h）。这表明EMS0.7%4h处理的白三叶与秋水仙素0.5%12h处理的白三叶与其他各组白三叶突变体材料的遗传差异相对较大，遗传距离也较大，各自单独成组，其余可聚成4组。20份白三叶材料在两个坐标轴的分布状况（PCO）以及三维图示所反映出的情况与UPGMA聚类分析所显示的结果基本一致。20个样本大致分为三类，都显示了样品1和样品10距离其余各样本较远，相似系数差异较大，遗传变异差别较大，而其他各类样本相对比较集中，说明他们的遗传相似系数较为相近，变异系数小。