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内源性抗菌肽是天然免疫的重要介质，是炎症反应起保护作用的重要分子基础。β-防御素是新近发现的抗菌肽家族成员之一，在粘膜上皮广泛表达，包括气道和粘膜下腺体上皮细胞，是粘膜防御系统的重要介质。β-防御素是阳离子碱性小肽，具有广谱抗微生物活性，对细菌、真菌和包膜病毒均有效，还可作为趋化因子连接天然免疫和获得性免疫。人的β-防御素-1、-2、-3均可在气道上皮细胞表达，在呼吸道的粘膜防御屏障中具有重要作用。hBD-1、hBD-2和hBD-3在呼吸道均可被细菌或炎症预激因子等诱导表达。增加局部抗菌肽的浓度是治疗呼吸道耐药菌的一个方法之一，特别是对肺囊性纤维化(CF)病人。研究呼吸道上皮细胞抗菌肽的表达调控机制及其抗感染作用，不仅具有重要的理论意义，且可为发展新的抗感染措施作出重要贡献。 本研究的目的是以大鼠为动物模型研究β-防御素-2基因在呼吸道的表达和大肠杆菌培养上清对其基冈表达的影响，并评估β-防御素-2基因转染及BCG胞壁蛋白组分能否增强大鼠的抗感染能力。大鼠p一防御素一基因在呼吸道的表达调控及转基因研究一中文摘要 提取不同发育阶段大鼠肺组织的总RNA，RT一PCR检测显示从足月胎鼠、出生8小时和4天以及成年大鼠肺组织中均检察到相同强度的p一防御素一2 mRNA信号，提示大鼠价防御素一2基因在肺组织表现为固有表达。本实验室己有的研究显示大肠杆菌ML一35P株气道接种后可显著抑制大鼠肺组织rBD一2 mRNA的表达，本实验进一步表明大肠杆菌ATCC25922及其上清均可降低肺组织:BD一2 mRNA的表达，说明具有抑制其基因表达的活性物质可能存在于大肠杆菌的分泌物中。 目前抗菌肤的抗菌作用大多是用体外实验证明的，本研究试图用转基因方法以增强抗菌肤在呼吸道的表达，评估其在体内的抗感染作用。我们构建了:BD一2的真核表达载体PBK一CMV一rBDZ和peDN刀3.1一Mye一His(+)一rBDZ，因pcDNA/3.l一Myc一His(+)一rBDZ质粒表达的蛋白带有六个组氨酸标签，可通过检测6xHIS来检测:BD一2在蛋白水平上的表达。脂质体介导的重组质粒转染COS一7细胞，Westemblotting和琼脂糖弥散抗菌试验法检测的结果表明rBD一2在体外转染的细胞内表达，且具有抗菌活性;rBD一2重组质粒经气道转染后大鼠肺组织对绿脓杆菌的清除率明显高于对照组(n=8，尸二0.003)。 本实验室己有的实验显示BCG胞壁蛋白的18一29kDa组分可刺激体外培养的人肺腺上皮细胞p一防御素一l和LL一37 mRNAs表达增高和抗菌活性的增强。本研究评估了BCG的这一抗菌肤基因激活组分是否能增强呼吸道抗感染防御功能。经腹腔注射BCG胞壁蛋白活性组分4S小时后，由气管滴入绿脓杆菌制备大鼠肺感染模型，结果显示卡介苗胞壁蛋白抗菌肤基因激活组分可明显提高肺组织对绿脓杆菌的清除率(n=8，P=0.004)。