原代培养人脐静脉内皮细胞电离辐射效应的初步研究

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目的:初步探讨原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)受照射后在细胞周期分布、细胞凋亡和内皮素(ET)、一氧化氮(NO)分泌等方面的变化,以及照射剂量和照射后时间间隔对它们的影响。方法:来自人胎儿脐带的HUVEC经体外原代培养,使用透射电镜及人第Ⅷ因子抗体免疫组化的方法进行鉴定;用直线加速器的6MV X射线照射0~20Gy,在照射后6、24和48小时,用流式细胞仪(FCM)测定照射后细胞周期的变化,透射电镜及Annexin V-FITC联合PI双染色法在FCM上进行凋亡的定性和定量检测,用放射免疫法和硝酸还原酶法分别测定细胞培养液中内皮素(ET-1)和一氧化氮(NO)代谢产物NO2-的含量。结果:按本方法原代培养的HUVEC生长状态良好,在电镜下可见典型的血管内皮细胞(VEC)形态学特征、人第Ⅷ因子抗原免疫组化有阳性表达,证明是人的VEC。FCM检测发现经5、10和20Gy照射后24及48小时出现明显G0/G1期细胞的减少和G2/M期细胞的增加,而2Gy,照射时对细胞周期无影响。0~10Gy照射后48小时,透射电镜的定性和FCM的定量检测中,各照射组与对照组均未发现明显的细胞凋亡,死亡细胞也不明显。0~20Gy照射后24小时内,对照组ET-1含量为1304.47±126.86pg/1x105细胞/ml,5、10和20Gy照射组ET量明显减少,而2Gy照射组ET含量无明显变化;对照组24小时的NO2-量为48.39±12.48pg/1x105细胞/ml,各照射组24小时的NO2-含量与对照组比较无明显变化。结论:原代培养的HUVEC经的确为人血管内皮细胞,本方法取材方便、重复性好,可用于其它相关实验研究中;生长汇合的HUVEC只有在单次较大剂量(≥5Gy)照射后出现G2/M期阻滞和ET分泌的减少, 原代培养人脐静脉内皮细胞电离辐射效应的初步研究 中文摘要 而低剂量时则无影响;在 0~10Gy照射后 4 8小时内未引起细胞凋亡 与死亡;照射后24小时内皮细胞分泌的NO亦无明显变化。说明原 代培养的HUVEC有一定的辐射抗拒性,其机理有待进一步研究。
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