松花粉是我国传统食药兼用的花粉类中药,具有丰富的营养价值和多种生物活性,无论在临床应用还是保健品开发方面都具有广阔的前景。针对松花粉的应用越来越广泛,而松花粉的基础性研究薄弱等问题,本课题从资源调查与鉴定、化学成分的分离纯化与鉴定、有效部位的含量测定、指标成分的含量测定、指纹图谱、抗氧化性生物效价评价等方面对松花粉进行质量评价研究,以期建立松花粉的质量评价体系,为松花粉质量标准的制定提供依据。同时为加速松花粉产品的开发,发展松花粉食品、保健品、药品、化妆品和添加剂等提供条件。一.松花粉的鉴别通过调查发现受植物分布数量以及地方经济发展情况的影响,形成规模采收、在市场上流通的松花粉的资源植物的主要有：马尾松Pinus massoniana Lamb、油松Pinus tabulae formis Carr.及云南松pinus yunnanensis Faranch。由于松花粉花粉壁影响其成分的提取和吸收,因此市场上有破壁松花粉与未破壁松花粉之分,并且其价格存在较大的差异。由于松花粉价格较高,市场上流通的松花粉掺伪情况也较严重。收集了以上三个品种的松花粉。对其进行了性状和显微的鉴别。松花粉的破壁与否通过两种方法都可以鉴别,而通过显微鉴别同时测定了不同产地的三种松花粉(油松、马尾松、云南松)的长径、短径及气囊长径,发现此三种的差异：油松花粉的最小,云南松的花粉直径最大,马尾松花粉的则略小于云南松。同时显微鉴别也有利于观察松花粉的掺伪情况。二.松花粉化学成分的研究对云南松松花粉的三氯甲烷部位的化学成分进行了分离鉴定,得到2种成分：柚皮素C15H12O5及正三十二烷醇CH3(CH2)3oCH2(OH)。其中正三十二烷醇是首次在松花粉中分离得到。首次建立了HPLC测定松花粉中柚皮素与芦丁的含量的方法,并对13批松花粉进行了含量测定。结果表明,松花粉中柚皮素的含量较高,芦丁的含量较少。柚皮素的平均含量为0.207mg·g-1,芦丁的平均含量为0.0014mg·g-1。不同产地松花粉中柚皮素的含量存在较大差异,芦丁的含量差异不大。用紫外分光光度法测定了松花粉总甾醇、总黄酮、总多糖的含量。试验结果表明,.不同来源松花粉中总黄酮(0.16～0.75%)和总甾醇(0.98～7.67%)的含量差异较为明显,而总多糖的含量则相差不大(5.25～6.98%)。三.松花粉抗氧化性的生物效价评价研究生物活性效价评价在中药有效成分不明确或不确定的情况下,更显重要。首次采用紫外分光光度法以清除DPPH和羟基自由基的能力为指标,对松花粉的抗氧化性进行研究。结果表明松花粉提取液对DPPH与羟基自由基均有清除作用,且都呈明显的量效关系；松花粉与破壁松花粉清除DPPH的平均IC50分别为14.86g·L-1、12.95g·L-1,清除羟基自由基的平均IC50分别为20.31g·L-1、3.45g·L-1。建议把松花粉的清除自由基的能力作为衡量其质量的标准之一,其清除自由基的IC50作为其质量控制的指标。四.松花粉抗氧化作用与化学成分的关联把松花粉总黄酮、总甾醇及总多糖的含量与松花粉的清除羟基自由基与DPPH的作用进行了线性关联及多元相关性关联,结果表明松花粉总黄酮、总甾醇的含量与清除DPPH自由基、羟基自由基的IC50呈负相关,并以总黄酮的相关性最为突出,而总多糖的含量则与其关联性不显著。推断黄酮类成分是松花粉抗氧化作用的主要有效成分。柚皮素属于松花粉黄酮类成分的一种,并且柚皮素具有良好的清除自由基的作用,通过关联分析也表明,松花粉的柚皮素含量与其抗氧化活性关联性较大。因此,可以把松花粉中柚皮素的含量作为松花粉质量评价的一个量化指标。建议松花粉的质量标准中加入柚皮素的含量测定。五.松花粉指纹图谱的研究首次建立了松花粉HPLC指纹图谱的方法,对松花粉进行了指纹图谱的研究并进行聚类分析。结果表明此条件下不同产地松花粉指纹图谱相似度95%以上,聚类分析结果表明,马尾松松花粉和云南松松花粉区别显著。松花粉指纹图谱的药材HPLC指纹图谱的建立,可以更有效地控制松花粉的质量,为松花粉的质量控制提供了新的方法,使松花粉药材的质量标准更加全面、直观。