背景和目的心脑血管疾病是发达国家与发展中国家目前常见的死因。动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是一种多因素慢性疾病,到目前为止其危险因素已发现多种,仍在不断增加。AS的发展病理变化过程分为三个阶段:第一阶段为脂纹形成,第二阶段为纤维斑块形成,第三阶段为粥样斑块形成。目前对于动脉粥样硬化造成的血管病变主要有经皮血管成型术和动脉搭桥术这两种治疗方法,虽然上述治疗方法技术已经很成熟,但是术后出现血管吻合口处内膜增生、支架内再狭窄等并发症,使患者不能长期受益于这种治疗,从而导致较高的死亡率。肾素-血管紧张素-醛固酮系统(Rennin-angiotensin-aldosteronesystem,RAAS)是人体重要的体液调节系统,它能够调节水盐平衡、血管张力和交感神经活性。血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)是其重要的效应分子,参与动脉粥样硬化的形成,它需要通过其受体发挥生物学效应,主要是1型Ang Ⅱ受体(AT1R)介导了Ang Ⅱ大多数作用。受体激活后能够促进血管内皮细胞增生,刺激细胞产生大量的生长因子、趋化因子和细胞因子,促进炎细胞浸润,诱导强大的血管炎症反应。此外,AT1R的激活也能导致NF-κB转移到细胞核内,使细胞转录和翻译活动增加,促进血管平滑肌细胞(VSMC)迁移和增殖。所以AT1R基因自然就成为研究动脉粥样硬化的重要侯选基因。近几年Dzau,V.J克隆出了Ang Ⅱ的1型受体相关蛋白(Angiotensin Ⅱ Type I Receptor-Associated Protein,ATRAP),目前研究已经证实了ATRAP基因参与RAAS的调控,加强VSMC上AT1R的内化,故拮抗了AT1R介导的Ang Ⅱ的生物学效应,能够明显抑制VSMC的增殖。尽管如此,ATRAP作为血管疾病治疗方法中新的靶基因,其在作用于Ang Ⅱ介导的血管疾病中确切的分子机制仍不明确。随着科技的进步,基因治疗越来越受到人们的重视。目前已报道的基因治疗有很多种,但效果均不尽人意。所以,利用基因传递系统,我们有意将目的基因在直接暴露的手术部位转入到细胞内,上调能够抑制动脉粥样硬化发病的有关基因,可能抑制血管炎症反应和血管内膜增生,将可能会成为治疗动脉粥样硬化最可靠的方法。常用的基因载体系统有逆转录病毒、脂质体等,本实验选用的是感染效率较强的腺病毒载体。本研究旨在构建小鼠ATRAP的重组腺病毒pAD-ATRAP-HIS*6作用于离体培养的VSMC和大鼠颈动脉损伤模型上,以VSMC的增殖、凋亡情况、凋亡家族基因bax和bcl-2的表达量和对血管内膜增生的改变为观察检测指标,评价腺病毒介导的ATRAP感染VSMC的效率,论证ATRAP基因对VSMC增殖与凋亡的影响及其引起VSMC凋亡的分子作用机制。方法本实验利用腺病毒载体负载ATRAP,利用腺病毒感染体外培养的VSMC和大鼠损伤的颈总动脉。(1)构建腺病毒pAD-ATRAP-HIS*6,检测其滴度与感染能力。(2)体外实验:利用腺病毒介导的ATRAP感染VSMC,观察ATRAP对体外培养的VSMC的增殖与凋亡作用。(3)体内实验:用球囊损伤大鼠颈动脉建立内膜损伤增生的模型,用腺病毒感染损伤动脉,观察ATRAP对增生内膜的抑制作用。结果1.成功构建腺病毒pAD-ATRAP-HIS*6,滴度为1.34×109LFU/mL。2.体外感染腺病毒的VSMC中观察到ATRAP的mRNA和蛋白的高水平表达。3.在Ang Ⅱ刺激后的VSMC中感染腺病毒,观察到ATRAP能够抑制VSMC的增殖。4.在Ang Ⅱ刺激后的VSMC中感染腺病毒,观察到ATRAP能够促进VSMC的凋亡,并且观察到凋亡蛋白bax的mRNA水平和蛋白水平的高表达和抗凋亡蛋白bcl-2的mRNA水平和蛋白水平的低表达。5.在损伤动脉处感染ATRAP观察到内膜增生减少,而对照组内膜增生严重。结论ATRAP能够明显抑制AT1R介导的VSMC的增殖,促进VSMC的凋亡,并且能抑制损伤后的内膜增生,从而抑制动脉粥样硬化的发展。