论文部分内容阅读
粘细菌是原核生物中一类具有复杂多细胞行为的革兰阴性细菌,能够在细胞间通过信号的传导和感应,协同摄食、运动和发育形成子实体,具有显著的社会特征,被认为是高等的原核生物。广泛分布于土壤中、枯枝上、粪便上以及其他腐烂的有机质上。据估计全球大约有几百万种微生物,仅有很小一部分微生物的代谢产物得到研究,为了能从天然微生物群中分离得到新型的天然生物活性化合物,大量的工作是从一些以前较少研究的微生物进行筛选。以前对粘细菌的研究较少,目前的研究结果统计,粘细菌能够产生丰富的次级代谢产物,而且次生代谢产物具有结构新、种类多、同种粘细菌的不同菌株产生的生物活性物质的差异很大的特点,因此,粘细菌具有重要的筛选开发价值。在对粘细菌进行活性筛选的过程中,我们发现多株粘细菌的发酵产物能抑制稻瘟霉分生孢子萌发生长,并引起稻瘟霉菌丝体末端膨大。其中粘细菌8#,11#,13#的发酵产物有很强的抑制和诱导变形作用,最小诱导变形浓度为1:256倍。本研究采用稻瘟霉模型活性追踪方法,应用低压柱层析、高效液相层析、薄层制备层析和凝胶柱层析等现代层析分离技术,对粘细菌8(#Myxococcus Xanthus 095B06)的发酵产物经行活性成分追踪分离,共分离得到化合物20个。运用多种现代光谱技术(1H-NMR、13C-NMR、HMQC、HMBC、DQF-COSY、NOESY、EI-MS、ESI-MS、ROESY、ROESY)和化学方法鉴定了其中10个化合物的结构:9个已知的化合物avermectin A1a、avermectin B1a、avermectin A2a、avermectin B2a、cerevisterol、cycle(L-Pro-D-Lea)、4-quinolinercarboxylic acid、22E,24R-5α,6β- Epoxygergosta-8(14),22-diene-3β,7α-diol、尿嘧啶和1个未知的化合物8 ,N((2R,3S,E)-1,3-dihydroxy-17-methyloctadec-8-en-yl)acetamide,其余化合物的结构正在解析中。利用纸片扩散法、四甲基偶氮唑盐比色法及稻瘟霉模型对分离得到的单体化合物进行生物活性评价,生物学活性研究表明,avermectin B1a和avermectin A1a对肿瘤细胞SMMC-7721、Hela的生长有中等程度的抑制作用,而avermectin B2a和avermectin A2a能强烈的抑制肿瘤细胞Hela和SMMC-7721,其IC50均为5μg/ml。结合活性推测C-23位有羟基取代可使活性增强,对avermectins的抗肿瘤作用起着决定性作用。化合物8不但能抑制稻瘟霉的生长,而且能导致稻瘟霉菌丝体末段膨大。同时,细胞毒活性表明,化合物8能抑制肿瘤细胞HeLa的生长,其IC50值为15μg/ml,化合物8也能抑制肿瘤细胞LoVo和MCF-7的生长,其IC50值分别为25μg/ml和20μg/ml。对新化合物8的抗肿瘤机制进行了初步的研究,发现新化合物8在作用于Hela细胞后,Hela细胞的caspase-3,caspase-8和caspase-9活性明显提高。说明化和物作用于Hela细胞后,通过激活caspase诱导调亡。已鉴定的10个化合物的结构如下图: