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本文研究目的:研究在体枯否细胞(KC)激活和灭活对大鼠再生肝细胞转录活性和功能分化的影响,探讨KC在肝再生过程中的作用。
研究方法:SD大鼠随机分成三组,即C组(切除2/3肝叶)、L组(切除2/3肝叶后立即注射LPS)和G组(GdCl3预处理后切除2/3肝叶),于处理后不同时间取肝,称重,计算再生肝重量比;以银染法检测核仁组成区相关嗜银蛋白的变化;以Gomori-铅法和比色法检测ACP的变化;以Gomori钙-钴法和比色法检测AKP的变化;以同工酶电泳方法检测乳酸脱氢酶的变化。
研究结果:(1)L组再生肝重量比在处理后16h~48h明显低于C组,而在72h~144h高于C组;G组再生肝重量比在16h~36h低于C组,在48h~144h均高于C组。(2)L组AgNORs的数量在处理后48h达到最大值(与正常对照组相比P<0.01),并在72h时高于C组(P<0.01);G组AgNORs的数量在36h即达到高峰(与正常对照相比P<0.01),早于C组(48h)。(3)ACP主要分布于细胞质中,C组ACP活性在4h较高,36h达到最大值(P<0.01);L组在处理后4h达到最大值(P<0.01),此后一直维持在接近正常对照的水平;G组ACP活性在术后4h即显著增高(P<0.05),4h~24h维持在高水平,24h~72h下降,96h升高到较大值(P<0.01),144h下降。(4)AKP主要分布在靠近细胞膜的部位,C组AKP活性在24h达到最高峰,以后逐渐下降,96h又上升至一高峰(P<0.01),144h后下降至接近正常水平;L组AKP活性在术后逐渐下降,一直维持较低水平,24h下降至最低点(P<0.05);G组AKP活性在8h即上升至最高峰(P<0.01),48h和72h又形成一高峰(P<0.05)。(5)大鼠肝再生过程中主要出现LDH2、LDH3、LDH4、LDH5四条同工酶带。C组有LDH2、LDH3、LDH5三条带,其平均密度均在肝再生的后期升高;L组主要有LDH2、LDH3、LDH5三条带;G组新增一条LDH4谱带,其平均密度在36h达到最高值。
研究结论:ACP和AKP在肝再生中起有重要的调控作用;肝切除后注射LPS,激活枯否细胞释放活性介质,使肝细胞转录活性受到抑制,从而抑制了早期的肝再生进程,这种抑制作用可能与AKP和ACP的活性降低相关;注射GdCl3灭活枯否细胞促进肝细胞的再生,这种促进作用可能与ACP和AKP的活性增强相关;注射GdCl3诱导再生肝出现的LDH4同工酶可能与肝细胞的分裂高峰相关。