【摘 要】
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目的:维生素是人体中不可或缺的一类微量、小分子的有机化合物,其作用是维持人体正常机能。由于维生素在人体中无法自主合成或者合成量较少,因此,日常所需维生素须通过摄入食物而获取。此外,维生素在调节机体物质代谢的过程中起到重要作用。维生素属于人体内源性代谢物,是维持人体健康所必需的物质,人体中维生素的不足或过量均会影响人体的正常功能及代谢平衡。因此,人体中维生素的含量可反映人体的营养状况。目前,测定维生
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目的:维生素是人体中不可或缺的一类微量、小分子的有机化合物,其作用是维持人体正常机能。由于维生素在人体中无法自主合成或者合成量较少,因此,日常所需维生素须通过摄入食物而获取。此外,维生素在调节机体物质代谢的过程中起到重要作用。维生素属于人体内源性代谢物,是维持人体健康所必需的物质,人体中维生素的不足或过量均会影响人体的正常功能及代谢平衡。因此,人体中维生素的含量可反映人体的营养状况。目前,测定维生素含量的方法主要包括酶免疫法、荧光分析法、液相色谱法及质谱法等。使用液相色谱-质谱联用技术在检测待测物质时,空白基质中所含有的待测物质会影响到标准样品中物质的浓度。目前,常使用碳吸附法去除生物基质中含有的待测物质,然而该前处理方法所需成本较高,且可能无法完全去除生物基质中的待测质。本研究的目的在于使用LC-MS/MS同时检测人体血清中VA、VD2、VD3和VE四种脂溶性维生素的含量,通过液液萃取法,建立一种适用于人体内源性代谢物的分析方法,可满足临床对于大批量样本检测需求的高效、快速、准确的检测方法。研究方法:色谱条件:色谱柱:Poroshell 120 EC-C18（4.6*50mm）2.7-Micron,流动相:A液:0.5%甲酸水+0.5mol/L甲酸铵+水（1:1:8）,B液:纯甲醇;流速:0.65ml/min,梯度洗脱:0.0-0.5min:流动相A:B=20:80,0.5-2.1min:流动相A:B=20:80,2.1-4.6min流动相A:B=4:96;4.6-6.8min:流动相A:B=0:100;6.8-9.2min:流动相A:B=15:85。进样量:20u L,柱温:40℃。质谱条件:电喷雾离子源（ESI）,多反应监测（MRM）扫描方式,离子化电压（IS）设为5500V,温度（TEM）设为350℃。采用液液萃取法,提取出人血清中的脂溶性维生素后,进行进一步的方法学验证。结果:本研究建立了一种可同时检测人血清中4种脂溶性维生素的方法。以质控样品计算,所得日内精密度不超过15%,日间精密度不超过15%。上述结果提示本研究方法具有较高的准确度和精密度,并且保留时间较短。稳定性结果表明,血清多种保存的情况下,RSD均不超过10%,表明样品在本研究方法下检测稳定。结论:本研究建立了一种可同时检测四种脂溶性维生素的新方法,使用液液萃取法,用牛血清蛋白（BSA）作为空白基质,同时加入VA、VD2、VD3和VE的标准品及内标后,得到可使用的标准曲线。本方法减少了基质效应的干扰,有效减少了VE对其余三种维生素的干扰作用。经由方法学验证,本方法满足评定标准,且具有良好的重现性以及准确性。因此,可使用本方法检测人血清中的VA、VD2、VD3和VE的含量。
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