广西罗城毛葡萄组织培养脱毒技术研究

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本实验以广西罗城毛葡萄主栽品种九龙二号、12号,二号为实验材料,分别以这三个品种的茎尖和幼嫩叶片为外植体,通过直接诱导丛生芽进行快速繁殖,并获得无根苗。同时运用热处理和茎尖培养结合来诱导毛葡萄脱毒苗,进行脱毒技术研究。实验分别从诱导、分化、增殖、生根、移栽等方面,探讨了罗城毛葡萄组织培养过程中培养基与激素配比、外植体的取材季节、取材部位、糖份对芽的形成和生长的影响以及培养过程中出现的褐化、玻璃化等问题。同时还对试管脱毒苗进行酶联免疫法检测脱毒情况以及测定脱毒苗的一些生理指标。实验结果表明,外植体的取材季节、取材部位均影响毛葡萄的灭菌效果以及萌芽率。毛葡萄外植体的采集以3~5月份为佳,存活率高,污染少,对芽的诱导也比较有利。同一枝条以中上部茎段较为有利。在芽的诱导中以蔗糖较葡萄糖有利于芽的形成。1/2MS培养基要比MS培养基的芽诱导率要高。6-BA与IAA组合较与NAA组合更有利于芽的形成。其中以6-BA2.0mg/L+IAA0.2mg/L的诱导效果最好。在继代培养中,以MS+6-BA1.0 mg/L+IAA0.01mg/L为继代培养基,植株生长快,繁殖系数为4.0。在外植体诱导芽的过程中,外植体比较容易出现褐化现象,本实验采用了活性炭、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)防褐化比较实验,发现聚乙烯吡咯烷酮效果较为理想,其中浓度为1%时抑制褐化效果最佳。在毛葡萄继代培养中,为减轻玻璃化现象,要使其在3000LX的强光照下培养。无根苗接种于1/2MS +BA0.2mg/L +IBA0.6mg/L的培养基中,生根快,不定根发育良好,利于移栽。在茎尖培养的芽变绿增大期,发现B5 +BA0.5mg/L+IAA0.1mg/L是比较理想的培养基;剥取0.8~1.0mm的茎尖存活率比较高;在进行热处理的时候,发现无根苗的存活率在变温处理时比恒温处理时要高,也就是白天37oC处理8小时,晚上22oC处理16小时,其中热处理时间以10天为宜,这样有利于无根苗的生长和脱毒;经过热处理的无根苗,最后进行病毒检测,发现已经脱去目标脱毒100%。
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