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单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种食源性病原菌,革兰氏染色阳性,在人体内主要以胞内感染形式存在。单增李斯特菌感染后可以引起脑膜脑炎,菌血症和败血症。虽然庆大霉素、卡那霉素对单增李斯特菌有抑制作用,但是抗生素的滥用会导致耐药菌的出现,因此急需寻求新的抑菌因子。噬菌体裂解酶(Bacteriophage lysin)是噬菌体感染宿主后期表达的可以裂解细菌细胞壁的肽聚糖水解酶类。天然的李斯特菌裂解酶不仅具有较强的种属特异性并且不易诱导细菌产生耐药性。但是天然李斯特裂解酶的活性大多比较低,因此急需发展高效的单增李斯特菌裂解酶。本研究通过将细胞穿透肽Tat与李斯特裂解酶Ply511融合发展了一种活性增强的李斯特裂解酶Ply511-N2。100μg/mL Ply511-N2能在60 min内使单增李斯特菌活菌数降低1-3个Log值,但是不能入胞杀菌。并且酶学性质表明,Ply511-N2能在温度为4-45℃和pH为6.0-11.0时保持良好的活性。Ply511-N2对李斯特菌有较高的特异性,对单增李斯特菌有良好的杀菌效果,对无乳链球菌、金黄色葡萄球菌和变异链球菌的活性较差。Ply511-N2在250μg/mL以下时对中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)毒性较低,实验条件下细胞保持了超过90%的活性。目前检测李斯特菌的方法因仪器昂贵,操作复杂,无法满足现场快速检测的需求。本研究第二部分结合前一部分发展的裂解酶,利用生物体内ATP作为检测靶标发展了一种新型的李斯特菌检测方法,不仅特异性和灵敏性较高,而且简单易操作,不需要昂贵的仪器和专业的技术人员。由于Ply511-N2对单增李斯特菌具有较高的特异性,Ply511-N2检测单增李斯特菌时有ATP升高的现象,而检测金黄色葡萄球菌时没有ATP升高的现象。这种检测方法对单增李斯特菌的检测灵敏度可以达到10~4-10~5 CFU/mL。下一步希望对这种检测方法做更多的优化。本研究通过细胞穿透肽Tat序列与Ply511序列融合表达发展了一个活性比亲本裂解酶增强的裂解酶,并利用该嵌合裂解酶发展了一种单增李斯特菌快速检测的新方法,为进一步探索基于噬菌体裂解酶的李斯特菌治疗和快速检测打下了基础。