[目的]快速鉴定枳壳醇提物、水提物和挥发油中的主要化学成分;进行血清药物化学研究,确定枳壳入血成分;比较不同入药形式下枳壳主要活性成分的药代动力学参数;为枳壳的药效物质基础和质量控制提供分析依据。[方法]1.采用UPLC-Q-TOF/MS和GC-MS技术对枳壳甲醇提取物、水提取、挥发油进行全成分分析,并对其中的特征成分进行质谱解析。2.在血清药物化学理论指导下,采用UPLC-Q-TOF/MS技术,比较枳壳提取物、空白血浆、含药血浆图谱的差异,并利用Peakview和Metabolite Pilot数据处理软件,根据质谱所提供的保留时间、精确相对分子质量及二级质谱裂解碎片,结合前期研究结果鉴定枳壳口服给药后大鼠血浆中移行成分。3.建立一种快速高效的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法,以槲皮素为内标,采用电喷雾电离正负离子(ESI+/ESI-)切换,多重反应监测模式(MRM)进行检测,同时定量大鼠血浆中的5个活性成分(水合橙皮内酯、柚皮苷、新橙皮苷、橙皮内酯和川陈皮素),并将其应用于枳壳的多组分药动学研究。SD大鼠口服单体(柚皮苷、新橙皮苷)、配伍、枳壳提取物后,利用β-葡萄糖醛酸酶和硫酸酯酶对血样进行预处理。采用DAS 3.1软件求算各化合物的药代动力学参数。[结果]1.本文从枳壳提取物中鉴定并推测了 133个化学成分,主要包括7类化合物,分别为二氢黄酮类、黄酮类、多甲氧基黄酮类、生物碱类、氨基酸(多肽)类、柠檬苦素类、香豆素类。从枳壳挥发油中鉴定了 94个挥发性成分。2.枳壳提取液口服给药后,从血浆中共检测到74个入血成分,其中49个原型成分,25个代谢产物,结合现有文献报道,可推测鉴别主要为黄酮类成分、多甲氧基黄酮类、以及少量的生物碱类成分的原型及代谢产物。3.UPLC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中水合橙皮内酯、柚皮苷、新橙皮苷、橙皮内酯和川陈皮素,5个化合物分离良好,响应高,在0.2112～3880 ng/mL范围内线性关系良好,日内精确度介于-8.66%至9.68%之间,日间精度在-9.34%～9.94%范围内,回收率在80%以上,无明显的基质效应,稳定性RSD值均在-13.50%至14.81%范围内。药代动力学结果显示,柚皮苷和新橙皮苷的平均血浆浓度-时间曲线出现双峰,且在给药后5分钟内在大鼠血浆中检测到,Tmax少于1h。水合橙皮内酯和橙皮内酯被迅速吸收(Tmax,约1h),但消除缓慢(t1/2z超过6.5 h)。根据Tmax和AUC(0-t),川陈皮素也被迅速吸收,Tmax值为 1.17±0.26h,AUC(0-t)值为 472.64±118.70 μg/L*h。5 个化合物的药动学过程均符合二室药代动力学模型。与单体组相比,配伍组(柚皮苷-新橙皮苷)与提取物组中柚皮苷和新橙皮苷的药代动力学参数存在显著差异:①AUC(0-∞),AUC(0-t)和Cmax值显著增加;②CLZ/F明显降低;③Tmax和t1/2z时间更长。[结论]枳壳所含有的化学成分较多,其主要的活性成分包括黄酮类化合物、生物碱类化合物和香豆素类化合物等。其中,生物碱、多甲氧基黄酮和香豆素类化合物主要以原型入血并发挥作用,而指标成分柚皮苷和新橙皮苷等主要通过水解成苷元而发挥功效。柚皮苷和新橙皮苷可以促进相互吸收并影响代谢行为,枳壳提取物中其他成分同时促进两者的吸收。进一步剖析枳壳的药效物质基础,需要整合多学科方法与技术,扩大枳壳有效成分的活性研究范围,并系统研究其体内作用过程。