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[目的]子宫肌瘤(uterine myoma)是女性生殖系统最常见的一种良性肿瘤,是由子宫平滑肌细胞异常增殖形成的,故又称为子宫平滑肌瘤(uterine leiomyoma,UL)。目前已经有明确报道表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)在子宫肌瘤的发病中具有非常重要的作用,因此我们的研究目的是探讨EGF在子宫肌瘤发生和发展过程中的作用机制,从而为子宫肌瘤的非手术治疗提供理论依据。
[方法](1)子宫肌瘤病人术后取子宫肌瘤和邻近正常子宫肌组织为对照,采用western blot检测组织中EGFR(Epidermal growth factor receptor)、p44/42
MAPK(p44/42 mitogen-activated protein kinase)的表达和磷酸化水平；(2)采用酶消化法培养子宫平滑肌(HM-SMCs)和子宫肌瘤平滑肌(HL-SMCs),并通过细胞计数、免疫荧光、western blot等手段鉴定其生长特性；(3)100 ng/mLEGF处理HM-和HL-SMCs24 h,LSC检测BrdU掺入率、多聚化,WST-1检测细胞增殖；并且采用western blots检测EGFR、p44/42 MAPK、AKT(Protein kinase B)、S6K(S6 kinase)的表达及磷酸化变化,p27蛋白的表达。
[结果]在正常子宫肌和子宫肌瘤平滑肌细胞的原代培养中,发现10％胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)无酚红的高糖DMEM培养基培养细胞时,子宫肌瘤平滑肌细胞的分化和增殖水平都较低。我们研究了子宫肌瘤与相应的子宫肌组织水平EGFR的表达和MAPK信号通路的激活水平,发现与相应的正常子宫肌组织相比,虽然在子宫肌瘤组织中总EGFR表达量低,但相对phospho-EGFR水平较高,而phospho-p44/42 MAPK水平较低。在子宫肌瘤平滑肌细胞中EGF能够通过EGFR和MAPK信号通路刺激细胞DNA合成,并且EGF的作用能够被EGFR抑制剂AG1478和MEK抑制剂PD98059抑制；而在正常子宫平滑肌细胞没有促进细胞周期的作用。通过western blots实验检测,我们发现虽然EGF对两种细胞p44/42 MAPK的活性都有激活作用,但在正常子宫平滑肌细胞中,EGF引起p44/42 MAPK持续平稳的激活,并且伴随着p44/42 MAPK信号通路下游p27表达水平的上调；而在子宫肌瘤平滑肌细胞中,EGF诱导p44/42 MAPK快速瞬时的激活,并且在激活后迅速下降,最终抑制p44/42 MAPK磷酸化,此过程伴随着p27蛋白极低水平的上调。同时,我们还发现子宫肌瘤平滑肌细胞中,EGF诱导的EGFR和AKT的磷酸化水平也较低。另外,EGF抑制子宫平滑肌细胞、子宫肌瘤平滑肌细胞的增殖,但是却能够促进子宫肌瘤平滑肌细胞的多聚化。
[结论]本研究表明EGF通过EGFR-p44/42 MAPK信号通路促进HL-SMCs的DNA合成,进而促进细胞多聚化,为EGFR在子宫肌瘤的发病中的重要作用提供了新的依据。