毛竹（Phyllostachys edulis）是我国分布面积最广的竹种,有着重要的经济价值和生态价值,但其生物学特性导致传统杂交育种难以开展。因此,建立稳定高效的再生体系对毛竹生物育种有着重要作用。然而,目前毛竹再生体系中仍存在外植体取材难、污染率高、愈伤组织诱导率低等问题,严重阻碍毛竹生物育种技术的开展。本研究以毛竹种子作为外植体,多角度寻找降低毛竹种子污染率的方法,探索不同植物生长调节物质组合、不同氮形态（铵态氮、硝态氮）配比及氮源浓度对毛竹种子愈伤组织诱导与增殖的影响,并分析氮形态配比对毛竹种子愈伤组织诱导和器官发生过程中代谢产物的影响。结论如下:1、以灭菌蛭石、灭菌滤纸、灭菌脱脂棉及纱布为介质进行毛竹种子无菌萌发,以期用萌发的无菌苗茎尖等部位诱导愈伤组织,结果显示灭菌蛭石更适合毛竹种子的无菌萌发,但无菌苗茎尖等部位在愈伤组织诱导过程中全部污染。因此,本研究直接以毛竹种子为外植体,进行愈伤组织诱导及增殖培养。研究发现,减少单个培养容器中接种的外植体数量可以有效降低毛竹种子污染率,通过使用小规格培养容器,每容器接种1粒种子可以保证低污染率的同时避免培养基的浪费。在此基础上,采用50%84消毒液消毒10 min+10%次氯酸钠消毒20 min处理的毛竹种子污染率低于且启动率高于10%次氯酸钠消毒20 min和50%84消毒液消毒20 min处理。2、不同细胞分裂素种类（KT、ZT、BA）和浓度(0.1、0.5、1 mg·L-1)及2,4-D浓度(2、4、8 mg·L-1)的L9（3~4）正交试验结果显示:不同处理下毛竹种子启动率差异较小,2,4-D浓度和不同细胞分裂素浓度对愈伤组织诱导率和萌发率的影响大于细胞分裂素种类,其中以2,4-D浓度为8 mg·L-1、细胞分裂素浓度为1 mg·L-1和细胞分裂素为ZT时,毛竹种子愈伤组织诱导率最高;而以2,4-D浓度为2 mg·L-1、细胞分裂素浓度为0.5 mg·L-1和细胞分裂素为BA时,毛竹种子萌发率最高。因此,最终筛选出毛竹种子愈伤组织诱导最佳配方为MS+1 mg·L-1ZT+8 mg·L-12,4-D。将诱导的愈伤组织转入MS+4 mg·L-12,4-D培养基增殖培养30 d,再挑选颜色、质地均一的愈伤组织转入不同增殖培养基培养,结果显示:愈伤组织在不添加植物生长调节物质的MS培养基中增殖率最高,且结构紧密、无褐化;在添加NAA、2,4-D和ZT的增殖培养基中的出现不同程度的褐化、水渍化以及死亡现象。3、毛竹种子在不同铵硝配比的诱导培养基中(总氮浓度为60 mmol·L-1)发育状态差异较大,有诱导出愈伤组织、萌发成根和芽、以及愈伤组织与根芽同时存在三种状态。毛竹种子启动率和愈伤组织诱导率在NH4+/NO3-配比为40/20时最大,分别为85.02%和67.87%,而在NH4+/NO3-配比为0/60最小,分别为72.06%和11.41%;萌发率在NH4+/NO3-配比为30/30时最高,为70.83%,而在NH4+/NO3-配比为60/0时最低,为48.25%。从诱导培养基中获得的愈伤组织,转入同处理培养基中继代增殖30 d,进一步研究不同铵硝配比对毛竹愈伤组织增殖的影响,结果表明愈伤组织增殖率在NH4+/NO3-配比为30/30时最高,为250.86%,而在NH4+/NO3-配比为0/60最低,为48.54%。4、随着培养基中氮源浓度的增加（固定培养基中NH4+/NO3-配比为40/20）,毛竹种子启动率、愈伤组织诱导率、萌发率和愈伤组织增殖率均先增加后降低。其中毛竹种子启动率和愈伤组织诱导率在氮源浓度为30 mmol·L-1时最高,分别为89.29%和82.14%,在氮源浓度为180 mmol·L-1时最低,分别为58.70%和29.76%;毛竹种子萌发率和愈伤组织增殖率在氮源浓度为90 mmol·L-1时最高,分别为63.33%、181.35%,而在0 mmol·L-1时最低,分别为18.85%、52.41%。5、用LC-MS检测不同NH4+/NO3-处理诱导毛竹种子愈伤组织的共30个样本,共鉴定出641种代谢物。差异代谢物的筛选发现,愈伤组织诱导率较高的组中氨基酸及其衍生物、多数脂类、一部分苯及其衍生物发生上调;类黄酮化合物、香豆素及其衍生物发生下调。差异代谢物主要参与苯丙烷生物合成、次生代谢产物的生物合成、类黄酮生物合成、植物激素信号传导、氨基酸的生物合成、脂质代谢等代谢途径。其中天冬酰胺、生物细胞素、茉莉酸、12-氧代植物二烯酸、水杨酸、杨梅素、异牡杜荆、芹菜素等为关键性代谢物。推测在毛竹种子愈伤组织诱导的过程中,大量氨基酸及其衍生物积累为愈伤组织形成提供能量和底物,同时与类黄酮及其衍生物、脂质等相互作用,促进茉莉酸、水杨酸等植物激素的合成,促进愈伤组织形成。