目的:构建含绿色荧光蛋白的人Aplysia Ras Homolog Ⅰ(ARHI)基因的真核表达载体,在宫颈癌细胞(HeLa)中进行表达并检测其蛋白活性。 方法:采用PCR方法从pcDNA3.0-ARHI质粒中得到ARHI基因,将其重组到pEGFP-N1真核表达载体上,经测序鉴定正确后,转染宫颈癌细胞(HeLa),进行表达。然后分别用RT-PCR、FCM、MTT和Hoechst等方法鉴定人ARHI基因的表达及研究其产物的生物学活性。 结果:琼脂糖凝胶电泳结果显示RT-PCR扩增出的特异片段约700bp,序列测定结果与GenBank报道的完全一致,结果成功构建了含人ARHI基因的真核表达载体,将其转染HeLa细胞后,24小时观察到绿色荧光,表明ARHI基因在HeLa细胞中得到了表达。用FCM、MTT和Hoechst等方法检测发现该基因能诱导HeLa细胞的凋亡。 结论:ARHI基因能诱导HeLa细胞凋亡,提示ARHI基因可作为宫颈癌基因治疗的一个新的候选基因。本实验为进一步研究该基因的抗肿瘤的分子机制及进一步将该基因用于临床的基因治疗打下了基础。