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目的： 1.观察肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae，SP)感染人肺泡Ⅱ型上皮细胞源肺腺癌细胞系A549条件下，细胞形态变化并检测细胞凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2、caspase-3的表达。 2.研究抗菌肽（antimicrobial peptides AMPs，包括hBD2和LL37）对SP感染的肺上皮细胞A549的凋亡有无保护作用。 3.探讨人β防御素2(humanβdefensin2，hBD2)和LL37对受SP感染的A549细胞的凋亡有无协同保护作用。 方法： 奥普托欣(Optochin)试验观察菌株抑菌环直径。A549细胞培养传代后接种于6孔板或96孔板，RPMI1640培养液培养细胞（含10％ FBS，1％100×青霉素-链霉素），待细胞生长至70％～80％融合时，SP感染细胞以建立感染模型，细菌感染前24h改用无双抗RPMI1640培养基培养细胞，感染前6h加入不同浓度的hBD2和LL37。实验分组:空白组（仅细胞），感染组（含细胞及SP），hBD210组即hBD2实验部分10ng/ml组(含细胞、SP及hBD2)、hBD220组即hBD2实验部分20ng/ml（含细胞、SP及hBD2）和hBD230组即hBD2实验部分30ng/ml（含细胞、SP及hBD2），LL371即LL37实验部分1ug/ml组（含细胞、细菌及LL37）、LL375即LL37实验部分5ug/ml组（含细胞、细菌及LL37）及LL3710即LL37实验部分10ug/ml组（含细胞、细菌及LL37），hBD230+ LL3710组(含细胞、细菌、hBD230ng/ml和LL3710ug/ml)。均设3次独立实验。 实验方法如下: 1.细胞活力检测 不同浓度的hBD2和LL37分别预处理A549细胞6h后，予SP以感染分数(multiplicity of infection，MOI)为20[1]，感染A549细胞18h[1]，CCK-8法检测细胞活力。 2.qRT-PCR检测A549细胞Bax/Bcl-2及caspase-3 RNA的表达 待细胞于6孔板内生长至70％～80％融合时，予不同浓度的hBD2和LL37预处理A549细胞6h，随后予SP感染18h(MOI:20)，qRT-PCR检测A549细胞内Bax/Bcl-2及caspase-3RNA的表达。 3.Western Blot检测A549细胞Bax及caspase-3蛋白的表达 细胞于6孔板内生长至70％～80％融合时，予不同浓度的hBD2和LL37预处理A549细胞6h，随后予SP感染18h(MOI:20)，Western Blot检测A549细胞内Bax及caspase-3蛋白的表达。 4.免疫细胞化学法检测A549细胞Bax/Bcl-2蛋白的表达。 细胞于6孔板内生长至70％～80％融合时，予不同浓度的hBD2和LL37预处理A549细胞6h，随后予SP感染18h(MOI:20)，免疫细胞化学法检测A549细胞Bax/Bcl-2蛋白的表达。 结果： 1.奥普托欣试验 35℃培养箱孵育18-24h后，菌株抑菌环直径＞14mm，菌落呈肚脐征，提示为SP。 2.A549细胞形态观察 未感染的A549细胞呈圆形、椭圆形、多角形或梭形等多种形态;SP感染的A549细胞呈圆形、椭圆形，体积缩小，两侧有突起，胞浆内可见空泡及多个颗粒等，核浆比例缩小;经hBD2和LL37预处理的细胞形态介于两者之间。 3.hBD2和LL37以浓度依赖性影响SP感染后A549细胞的活力 MOI为20，SP感染时间为18h，随hBD2及LL37浓度的增加，A549细胞活力增加。当hBD2浓度为30ng/ml，LL37浓度为10ug/ml时，细胞活力较感染组比较，显著增加，差异有统计学意义（分别为P＜0.01，P＜0.05）。 4.hBD2以浓度依赖性影响SP感染后A549细胞Bax/Bcl-2、caspase-3 RNA的表达。 qRT-PCR检测发现:MOI为20，SP感染时间为18h，随hBD2浓度的增加，A549细胞表达Bax及caspase-3 RNA减少，Bcl-2RNA增加。当hBD2浓度为30ng/ml时，变化较对照组显著增加，差异有统计学意义(P＜0.05)。 5.hBD2和LL37对SP感染后A549细胞表达蛋白Bax及caspase-3影响 Western Blot检测经hBD2和LL37预处理的A549细胞，经SP感染后，细胞内表达蛋白Bax及caspase-3的变化，MOI为20，SP感染时间为18h时，随hBD2和LL37浓度的增加，A549表达Bax及caspase-3蛋白与感染组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。 6.hBD2和LL37对SP感染后A549细胞表达蛋白Bax/Bcl-2的影响 免疫细胞化学检测发现，经hBD2和LL37预处理的A549细胞，凋亡蛋白Bax随hBD2和LL37浓度的增加，逐渐下降，与感染组比较，差异有统计学意义。 结论： 1.hBD2通过抑制凋亡蛋白Bax和caspase3的表达，以浓度依赖性保护SP感染的A549细胞的凋亡。 2.LL37以浓度依赖性增加SP感染的A549细胞活力，对凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2及caspase3无明显影响。 3.hBD2和LL37对SP感染的A549细胞的凋亡没有协同保护作用。