【摘 要】
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阿维菌素(avermectins,AVMs)属大环内酯类抗生素,但它与具有抗菌作用的一般大环内酯类抗生素不同的是具有较高的杀虫活性。作为一种应用较广泛的抗寄生虫药,其在水产养殖中被用来治疗水产养殖品种因三代虫、指环虫等引起的疾病。在中华绒螯蟹养殖中,阿维菌素被用来去除野生鱼类和寄生虫,然而水生动物对其较为敏感,残留的阿维菌素对中华绒螯蟹的生长和品质有很大的影响。近年来,微生物修复作为生物修复的主要
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阿维菌素(avermectins,AVMs)属大环内酯类抗生素,但它与具有抗菌作用的一般大环内酯类抗生素不同的是具有较高的杀虫活性。作为一种应用较广泛的抗寄生虫药,其在水产养殖中被用来治疗水产养殖品种因三代虫、指环虫等引起的疾病。在中华绒螯蟹养殖中,阿维菌素被用来去除野生鱼类和寄生虫,然而水生动物对其较为敏感,残留的阿维菌素对中华绒螯蟹的生长和品质有很大的影响。近年来,微生物修复作为生物修复的主要方式,逐渐发展起来成为处理环境中残留农药的有效手段。本文以阿维菌素为主体,以静态染毒法探究阿维菌素对中华绒螯蟹的毒性效应,从中华绒螯蟹养殖池塘底泥中分离筛选出一株阿维菌素降解菌AVM-2,并对该菌株的降解效率进行研究,具体结果如下:(1)采用每24 h定期更换1次试验用水的方法进行阿维菌素对中华绒螯蟹的急性毒性试验,确定AVMs对中华绒螯蟹的24 h-LC50、48 h-LC50、72 h-LC50、96 h-LC50分别是21.875、13.403、9.108和7.1 mg/L,其安全浓度为1.51 mg/L。设置96 h-LC50的1/2、1/5、1/10浓度为实验组,即3.55、1.42和0.71 mg/L进行慢性毒性实验。在慢性毒性实验的第1、3、6、10、15天检测肝胰腺超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、酚氧化酶(PO)活性以及丙二醛(MDA)的活性,并且检测相关基因转录水平的变化,并在胁迫15天HE染色观察肝胰腺的病理学变化。实验结果表明:肝胰腺SOD、CAT、PO的酶活性及基因转录均呈现先上升后降低的趋势;低浓度和中浓度组的SOD、CAT和PO酶活在第6天达到峰值,高浓度组在第3天达到最大值,体现出剂量与时间依赖性;MDA的含量随胁迫时间增加累积,高浓度组累积量较大。经过15天胁迫,HE染色证实肝胰腺损伤严重,B细胞数量减少,出现空泡;肝胰腺基膜增厚,且与柱状上皮细胞分离;高浓度组中空泡体积增大,管腔内出现内容物。结果表明,中华绒螯蟹肝胰腺在阿维菌素胁迫下受到氧化胁迫和组织损伤。此外,阿维菌素与肝胰腺受损伤程度之间存在一定的剂量效应关系。(2)长期受阿维菌素污染的中华绒螯蟹养殖池塘底泥进行处理后,加入到含阿维菌素的基础盐培养基中进行驯化,而后富集培养液稀释并涂布于阿维菌素浓度梯度筛选培养基平板上。平板上长出的单菌落被挑选进行纯化,分离筛选出一株降解阿维菌素的优势菌株AVM-2。通过形态学观察发现菌株AVM-2在LB固体培养基上呈圆形、略有凸起、乳白色、表面光滑;透射电镜下观察菌体呈杆状、有鞭毛;革兰氏染色菌株为革兰氏阴性菌。生理生化实验显示该菌株硝酸盐还原表现为阳性,靛基质、V·P实验、ONPG、蔗糖、棉籽糖、山梨醇、枸橼酸盐、木糖等均为阴性。结合16s r DNA基因序列分析,证实该菌株属于苍白杆菌属(Ochrobatrum sp.)。对菌株的降解效率研究中发现Ochrobatrum sp.AVM-2在低菌量时,对阿维菌素的降解效率随接种量增大而升高;当细菌接种浓度为4×106CFU/m L时,其对阿维菌素的降解效率最高,30℃条件下对阿维菌素72 h内的降解率达到32.1%;随后,随着细菌接种浓度的增加,阿维菌素的降解率下降并趋于稳定。
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