论文部分内容阅读
目的：研究胡椒有效成分——5,7-二甲氧基黄酮(5,7-dimethoxyflavone, DMF)对人卵巢癌SKOV3细胞系干细胞样细胞(Ovarian cancer stem like cells, OCSLCs)自我更新能力、增殖能力及Twist蛋白表达的影响,初步探讨胡椒有效成分(DMF)抑制卵巢癌干细胞特性的作用机制。方法：体外培养人卵巢癌SKOV3细胞系,采用干细胞条件培养基悬浮培养法富集并扩增得到卵巢癌球形成细胞,并鉴定作为OCSLCs.肿瘤球形成实验检测OCSLCs自我更新能力。Western blot分析SKOV3细胞系肿瘤球形成细胞的干细胞生物标志物CD133、 CD44蛋白表达状态。采用裸鼠皮下移植瘤模型检测人卵巢癌SKOV3细胞系细胞和卵巢癌球形成细胞的裸鼠皮下成瘤能力,并将移植瘤进行组织切片,HE染色后在光学显微镜下检测病理组织学形态。MTT法测定胡椒有效成分(DMF)对OCSLCs增殖活性的影响。Western blot分析对照检测SKOV3细胞系细胞与OCSLCs的Twist蛋白表达以及胡椒有效成分(DMF)对Twist蛋白表达的影响。结果：1.人卵巢癌SKOV3细胞系在干细胞条件培养基悬浮培养中,成球生长,形成卵巢癌球。2.肿瘤球形成实验结果表明人卵巢癌SKOV3细胞系卵巢癌球形成细胞具有自我更新能力。3.与人卵巢癌SKOV3细胞系细胞相比,人卵巢癌SKOV3细胞系球形成细胞中的干细胞标志物CD133、CD44蛋白表达水平更高。4.裸鼠皮下成瘤实验表明人卵巢癌SKOV3细胞系卵巢癌球形成细胞具有高致瘤性。5.MTT实验表明胡椒有效成分(DMF)能够抑制OCSLCs细胞的增殖活性。6.胡椒有效成分(DMF)具有抑制OCSLCs裸鼠皮下成瘤功效。7.胡椒有效成分(DMF)具有抑制OCSLCs细胞自我更新的作用。8.胡椒有效成分(DMF)以剂量依赖方式抑制Twist蛋白表达。结论：1.采用干细胞条件培养基悬浮培养法富集扩增得到的人卵巢癌SKOV3细胞系卵巢癌球形成细胞具有卵巢癌干细胞特性。2.胡椒有效成分(DMF)具有抑制OCSLCs自我更新、增殖及裸鼠皮下成瘤作用。3.胡椒有效成分(DMF)抑制OCSLCs自我更新作用可能与其下调肿瘤干细胞信号分子Twist蛋白表达相关。4.胡椒有效成分(DMF)影响OCSLCs特性,调节Twist蛋白表达,可能是其针对卵巢癌“阳虚寒凝”的病机根本及“痰”、“瘀”等病理因素,发挥温阳散寒、化痰祛瘀功效,达到抗卵巢癌效应的途径之一。