从发病率来看,中国食管癌发病率及死亡率占全球总发病率的一半以上,因而食管癌成为我国肿瘤防治方面的重点。河北省作为食管癌高发地区,涉县、磁县、武安等地区的食管癌尤其高发,呈明显的区域性。据相关部门的统计,河北省的这些地方是全国食管癌发病率4倍以上。河北省肿瘤医院作为河北省内最大的肿瘤医院,将食管癌的防治作为首要任务。目前,手术是治疗食管癌常用方法,单纯手术治疗5年生存率不超过20%,并且术后一年内复发率达22%。我们提出食管癌的核心病机是“血液衰耗,胃脘干槁”,而常说的气郁、血瘀、痰阻都是伴随着核心病机出现的不同表象。提出治疗大法为“甘润濡养”,临床应用加味启膈散可以明显抑制接受手术后食管癌患者以及晚期患者肿瘤转移情况。本实验探究加味启膈散对食管癌上皮细胞间质化的作用,揭示抑制食管癌细胞的侵袭转移的机制。目的:探讨加味启膈散对食管癌细胞上皮细胞间质化的影响,揭示加味启膈散通过抑制食管癌细胞的上皮细胞间质化,从而抑制食管癌细胞迁移侵袭能力,减少食管癌的转移。方法:1本研究选用高分化食管鳞癌细胞TE1,分为对照组、加味启膈散50μg/ml、加味启膈散100μg/ml,加入加味启膈散培养24小时后,分运用Western blotting检测三组食管癌细胞株细胞snail蛋白、cytokeratins14蛋白和Vimentin蛋白的用药前后表达。2应用激光共聚焦检测对照组、加味启膈散50μg/ml、加味启膈散100μg/ml,加入加味启膈散培养24小时后,对TE1细胞的结构的影响。3应用划痕实验检测对照组、加味启膈散50μg/ml、加味启膈散100μg/ml,加入加味启膈散培养24小时后,对TE1细胞迁移能力的影响。4应用Transwell法检测对照组、加味启膈散50μg/ml、加味启膈散100μg/ml,加入加味启膈散培养24小时后,对TE1细胞侵袭能力的影响。结果:1 Western blotting法测加味启膈散对TE1中snail蛋白、cytokeratins14蛋白和Vimentin蛋白的表达。snail蛋白结果显示,对照组0.150±0.070,当加味启膈散浓度为50μg/ml时为0.121±0.003,当加味启膈散浓度为100μg/ml时0.034±0.004。Vimentin蛋白结果显示,对照组0.163±0.005,当加味启膈散浓度为50μg/ml时为0.128±0.005,当加味启膈散浓度为100μg/ml时0.055±0.008。cytokeratins14蛋白结果显示,对照组0.035±0.003,当加味启膈散浓度为50μg/ml时为0.038±0.003,当加味启膈散浓度为100μg/ml时0.033±0.001。2激光共聚焦检测加味启膈散对TE1结构骨架蛋白角蛋白cytokeratins14的影响,结果显示对照组呈现纺锤形或梭形的不规则的间质细胞形态;当加味启膈散浓度为50μg/ml时,较对照组更趋向于圆形或是方形的细胞形态;当加味启膈散100μg/ml时,TE1呈现椭圆形或方形的规则的上皮细胞形态。3划痕实验检测加味启膈散对TE1迁移的影响,将TE1分为加味启膈散50μg/ml、加味启膈散100μg/ml组及对照组。12h后,结果显示,对照组35.366±1.665,当加味启膈散浓度为50μg/ml时为57.166±2.000,当加味启膈散浓度为100μg/ml时77.566±3.066。24h后,对照组26.633±2.753,当加味启膈散浓度为50μg/ml时为35.133±3.780,当加味启膈散浓度为100μg/ml时46.366±2.375。4 Transwell法测加味启膈散对TE1侵袭的影响。结果显示,对照组105.626±3.785,当加味启膈散浓度为50μg/ml时为65.523±5.131,当加味启膈散浓度为100μg/ml时为25.366±4.131。结论:1加味启膈散可以抑制snail蛋白、Vimentin蛋白的表达(P<0.05)。当加味启膈散浓度为100μg/ml时,对snail蛋白、Vimentin蛋白的抑制优于加味启膈散浓度为50μg/ml。2对照组、加味启膈散50μg/ml组、加味启膈散100μg/ml组中的cytokeratins14的表达没有统计学意义(P>0.05)。3加味启膈散干预后的食管癌细胞由纺锤形或梭形的不规则的间质细胞形态转变为规则的椭圆形或方形的上皮细胞形态。4划痕实验证实加味启膈散可以抑制食管癌细胞迁移(P<0.05)。当加味启膈散浓度为100μg/ml时,对TE1迁移能力的抑制优于加味启膈散浓度为50μg/ml。5 Transwell实验证实加味启膈散可以抑制食管癌细胞的侵袭(P<0.05)。当加味启膈散浓度为100μg/ml时,对TE1侵袭能力的抑制优于加味启膈散浓度为50μg/ml。