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胸膜肺炎放线杆菌(APP)是猪传染性胸膜肺炎的致病病原。本文利用基因工程技术成功构建了胸膜肺炎放线杆菌apxⅠC基因插入失活突变菌株和apxⅠA基因部分缺失突变菌株，并分析了突变菌株的免疫原性，为研制对不同血清型具有交叉保护活性的猪传染性胸膜肺炎减毒活疫苗奠定了基础。
利用PCR技术扩增出APP血清10型apxⅠC基因及其上下游约2.8kb的基因片段，经克隆测序后在apxⅠC基因下游XhoⅠ位点插入大小为0.9kb的氯霉素抗性基因片段，构建出转移载体pUIC-Chlr。经电转化将转移载体导入APP血清10型野生菌株(D13039)，通过同源重组获得突变菌株D13039C-Chlr，对突变菌株进行了鉴定和生物学特性分析。结果表明，突变菌株的增殖能力不受影响，能正常分泌ApxⅠ毒素蛋白，溶血活性和对小鼠的毒力大大降低，且可稳定传代；免疫仔猪后对同种血清型和不同血清型菌株的攻毒可提供部分交叉保护活性。
为分析ApxⅠ毒素蛋白不同功能区的免疫原性，利用PCR技术扩增出APP血清10型大小约3.2kb的apxⅠA基因及其N端(1.4kb)和C端(1.8kb)基因片段，经克隆测序后分别插入原核表达载体pET-32a中进行原核表达，进而分析了表达蛋白的免疫原性。结果表明，表达的融合蛋白大小分别约为125kDa、65kDa和80kDa；表达的ApxⅠA蛋白免疫小鼠，可诱导对APP血清10型攻毒的100％的保护，但对APP血清1型的攻毒保护率仅为40％，与天然ApxⅠ毒素蛋白免疫活性无显著差异；ApxⅠA-N端表达蛋白免疫活性显著高于ApxⅠA-C端表达蛋白，提示ApxⅠA毒素蛋白N端含有更多的免疫活性位点，在ApxⅠ毒素蛋白的免疫活性中发挥更重要作用。
利用PCR技术从APP血清10型基因组中扩增出apxⅠA基因C端的上游约1.8kb及下游约1.7kb的基因片段，从质粒pACYC184中扩增出约1.1kb的氯霉素抗性基因片段，经克隆测序后将上述基因片段串联并插入pUC19的相应位点，构建出转移载体pUIA-Chlr，经电转化将转移载体导入APP血清10型野生菌株(D13039)，经同源重组获得缺失ApxⅠA毒素蛋白C端功能区而保留毒素免疫原性且毒素失活的突变菌株D13039A-Chlr，对突变菌株进行了鉴定和生物学特性分析。结果表明，突变菌株可正常增殖，无溶血性，仅能表达ApxⅠA毒素N端约48kDa的蛋白，对小鼠的毒力降低100倍以上，且可稳定传代；免疫仔猪后对同种血清型和不同血清型菌株的攻毒均可降低死亡率和肺损伤程度，提示该突变菌株具有较好的交叉保护活性。