中国被毛孢液体发酵工艺优化及其多糖制备

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冬虫夏草(Cordyceps(Berk)Sacco.)为麦角菌科(Clavicipiraceae)虫草属(Cordyceps),主产于青海、云南、西藏、贵州、四川等海拔3500~5000米山中的草甸土中,作为中药药材的是冬虫夏草菌的子座和它的寄主虫草蝙蝠蛾(Hepialusarmoricanus Oberthur)的长满菌丝体的幼虫体,含有丰富的生理活性物质,为中国特产的名贵中药材。本论文实验出发菌株为中国被毛孢(Hirsutellasinensis)。中国被毛孢被证明为合格发表的冬虫夏草的无性型。由多个单糖或其衍生物聚合而成的是一切生命有机体必不可少的同维持生物机能密切相关的大分子活性化合物为多糖。多糖是非特异性的免疫调节剂,具有抗肿瘤、抗凝血、抗炎、抗病毒、降血脂、降血糖、抗辐射等生物学活性,正逐步成为新药研究开发的重要方向之一[1-2]。本文以中国被毛孢为研究对象,以菌丝干重为目标,对中国被毛孢的发酵条件和培养基进行优化;以中国被毛孢胞外多糖提取量为目标,对中国被毛孢多糖的制备进行优化。在10L小发酵罐上用半合成的培养基进行培养,并将发酵的菌丝体与发酵液分离,然后将菌丝体干燥,将发酵液先浓缩再提取胞外多糖并进行柱前衍生高效液相色谱分析。为了增加中国被毛孢菌丝体的产量,首先进行发酵条件的优化。用PDA再加1.5%蚕蛹粉的半合成的培养基对中国被毛孢进行摇瓶发酵培养,探究出最佳的发酵条件:培养基初始pH6.5,摇瓶装液量为80mL/(250mL),温度18℃,摇床转速150r/min。其次,通过单因素及正交试验对培养基成分进行优化,最终优化出发酵培养基组成:葡萄糖5g/L,玉米粉15g/L,蛋白胨10g/L,蚕蛹粉5g/L,纯牛奶80mL/L,NH4Cl5g/L,KH2PO40.8g/L,MgSO4·7H2O0.3g/L,核黄素(VB2)0.8mg/L。采用此培养基在10L发酵罐里培养9d,得到菌丝体干重为14.1g/L,胞外多糖干重为16.47g/L。中国被毛孢菌丝体和多糖产量都得到大幅度的提高。用95%的乙醇对离心浓缩发酵液中的中国被毛孢多糖进行提取,得出用4倍体积的乙醇提取量最高。再将粗多糖脱色、脱蛋白,进行柱前衍生高效液相色谱分析,得出中国被毛孢胞外多糖的单糖组成是葡萄糖、甘露糖、半乳糖。
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