论文部分内容阅读
滇重楼[Paris polyphylla var.yunanensis(Franch.)Hand.-Mazz.]是百合科(Liliaceae)重楼属(Paris)的一种多年生草本植物,因其种子休眠周期较长,目前仍无法人工大面积种植。由于人们长期采挖和需求的增加,造成了滇重楼资源的极度匮乏。目前滇重楼的地下根茎主要被用来提取皂苷,而药渣和地上茎叶则直接被丢弃,造成了资源的极大浪费。因此,本研究以滇重楼的地下根茎和地上茎叶为试验材料,分别对其多糖的提取工艺、纯化条件、结构解析及生物活性进行研究,旨在为滇重楼资源的高值化利用寻找新的途径,同时为滇重楼多糖的进一步开发利用提供理论依据和技术支撑。主要研究结果如下:1、在单因素试验的基础上,采用旋转中心组合设计(CCD)分别对滇重楼地上茎叶多糖(PPLPs)和地下根茎多糖(PPRPs)的提取条件进行优化,得到PPLPs的最佳提取条件为提取温度95 ℃、液料比29:1 mL/g和提取时间4.5 h,在此条件下,PPLPs的平均得率为13.16%;PPRPs的最佳提取条件为提取温度52 ℃、提取时间20 min、超声功率210 W和液料比49:1 mL/g,在此条件下,PPRPs的平均得率为6.68%。2、以体外抗氧化能力为评价指标,比较热空气高温干燥、室温真空抽干和真空低温冻干三种干燥方法对PPLPs和PPRPs清除DPPH自由基、羟自由基(·OH)和超氧阴离子(O2·-)的影响。结果表明:经真空低温冻干的PPLPs(PPLPs-F)和PPRPs(PPRPs-F)抗氧化能力最强,PPLPs-F对DPPH、·OH和02·-的最大清除率分别为79.89%、72.75%和72.49%,PPRPs-F对DPPH、·OH和O2·-的最大清除率分别为83.89%,74.05%和76.61%;在相同浓度下,PPLPs-F和PPRPs-F的体外抗氧化能力差异不显著。因此,真空低温冻干是滇重楼多糖的最佳干燥方法。3、对Sevag试剂去蛋白的次数与蛋白去除率和多糖损失率的关系进行了研究。综合考虑蛋白质去除率和多糖损失率,去除PPLPs中蛋白质的最佳处理次数为5次,此时蛋白去除率为74.47%,多糖损失率为31.49%;去除PPRPs中蛋白质的最佳次数为3次,此时蛋白质去除率为72.70%,多糖损失率为20.88%。依次采用DEAE-52 cellulose和Sephadex G100柱纯化了PPLPs和PPRPs。洗脱PPLPs-D(DEAE-52 cellulose纯化后的PPLPs)的NaCl浓度为0.3 mol/mL,洗脱PPRPs-D(DEAE-52 cellulose 纯化后的PPRPs)的NaCl浓度为0.5 mol/mL,表明经PPRPs-D的极性强于PPLPs-D;PPLPs-D和PPRPs-D经Sephadex G100纯化后分别得到PPLP和PPRP,PPLP的洗脱体积大于PPRP,说明PPRP的分子量较大。4、采用HPGPC法对PPLP的纯度和分子量进行了测定,结果表明:PPLP的洗脱曲线为一对称峰,说明PPLP为分子量均一的多糖,其平均分子量为2.95 × 104 Da;经GC分析,PPLP由阿拉伯糖(L-Ara)和半乳糖(D-Gal)组成,二者的摩尔比为0.42:0.58;经甲基化、部分酸水解和NMR分析,表明PPLP是以(1,6)-β-D-Galp为主链、在O-3位连有以α-L-Araf残基为主要成分的支链的阿拉伯半乳聚糖。5、体外抗氧化能力分析结果表明:PPLP对DPPH、·OH和O2·-的最大清除率分别为83.01%、74.54%和82.50%,其IC50值分别为0.26 mg/L、0.55 mg/mL和0.32 mg/mL;PPRP对DPPH、·OH和02·的最大清除率分别为78.94%、67.75%和77.92%,其IC50值分别为0.34 mg/mL、0.58 mg/mL和0.42 mg/mL。说明PPLP和PPRP均具有较强的体外抗氧化能力。6、通过注射D-Gal构建衰老小鼠模型,评价PPLP和PPRP的体内抗氧化能力。与衰老模型组相比,PPLP和PPRP高剂量组(400 mg/Kg/day)显著增加了小鼠体重(p<0.05),极显著的提高了小鼠胸腺和脾脏指数(p<0.01),极显著的增强了血清及脑、心脏和肝脏中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物还原酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化力(T-AOC)的活力(p<0.01),极显著的降低了血清及脑、心脏和肝脏中MDA的含量(p<0.01),表明PPLP和PPRP高剂量组在体内均具有较强的抗氧化能力。7、通过饲喂高脂饲料构建小鼠高血脂模型,分析了PPLP和PPRP的降血脂作用。结果表明:与高血脂模型组相比,PPLP和PPRP高剂量组(400 mg/Kg/day)显著减轻了小鼠体重(p<0.05),极显著的降低了血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)的含量及动脉粥样硬化指数(AI)(p<0.01),显著提高了高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)的含量(p<0.05),说明PPLP和PPRP的高剂量组均有较强的降血脂功效,且两者间降血脂功效差异不显著。