目的：龋病是人类最常见的一种慢性感染性疾病,低龄儿童龋是儿童龋病中的重要组成部分,在儿童生长发育中影响深远,变形链球菌属(变形链球菌、远缘链球菌)是最重要的致龋因子。牙菌斑中的致龋微生物在龋病中进展及群落结构变化尚不十分明确,本研究第一部分实验通过实时定量PCR方法对基线及一年后的四种主要致龋菌(变形链球菌、远缘链球菌、嗜酸乳杆菌、内氏放线菌)进行定量检测,监测无龋儿童(caries free, CF)、低龄儿童龋组(early childhood caries,ECC)和重度低龄儿童龋组(severe early childhood caries, S-ECC)儿童牙菌斑中相关致龋菌的动态变化。在微生物水平上对儿童龋的预防和治疗提供相关依据。第二部分研究则是利用Illumina MiSeq测序方法鉴定与低龄儿童龋及重度低龄儿童龋相关的菌群,并对两种龋敏感儿童中的富集的菌群做群落分析,由此为龋病防治提供生物干预措施。方法：1.2012年在德州市某幼儿园随机抽选60名3岁儿童,对其进行龋病检查和牙菌斑样本收集,1年后对同一批儿童再次进行龋病检查和牙菌斑样本采集。利用实时荧光定量PCR技术对两次样本中的4种主要致龋菌(变形链球菌、远缘链球菌、嗜酸乳杆菌和内氏放线菌)进行定量检测,并计算各致龋菌的比例。采用SPSS17.0软件包对实验数据进行统计分析。2.利用Illumina MiSeq测序方法,针对16SrRNA基因V4变异区设计通用引物进行测序分析,随机抽取第一部分实验中的纳入研究的7名ECC儿童和8名S-ECC儿童。并分析菌群微生物在龋病发生过程中的群落变化。结果：1.在基线及1年后患龋率分别为66.7%和81.7%,差异无意义(χ2=1.76,P>0.01)；dmfs分别为(5.80±2.53)和(7.90±1.76),差异有显著意义(t=3.51,P<0.01)。ECC、S-ECC组中4种致龋菌所占的比例在基线和1年后有统计学差异(P<0.01)。1年后ECC、S-ECC组中变形链球菌、远缘链球菌之和所占的比例显著高于基线水平(P<0.01)。2.利用Illumina MiSeq测序方法总计得到条1856169序列,经过预处理统计和质控得到的有效序列为1669057条,平均为57554。经鉴定有27种菌门和525种菌属。菌群微生物主要有5个主要优势菌门：变形菌门(Proteobacteria),放线菌门(Actinobacteria),厚壁菌门(Frmicutes),梭杆菌门(Fusobacteria),拟杆菌门(Bacteroidetes)。还发现有7种优势属：Parascardovia, Streptococcus(链球菌属),Leptotrichia(纤毛菌属),Neisseria (奈瑟菌属),Prevotella (普氏菌属),Veillonella (韦荣球菌属),Corynebacterium(棒状杆菌属),这些菌属与龋病进展的相关。像密螺旋体属,金氏菌属,嗜血杆菌属等菌属在本研究中含量极低,仅可在某些样本中检测出,这些菌属的致龋作用需要更进一步的研究。结论：1.儿童牙菌斑中主要致龋菌(变形链球菌、远缘链球菌、嗜酸乳杆菌、内氏放线菌)的比例变化与低龄儿童龋、重度低龄儿童龋密切相关,致龋菌所占总菌的比例越高,儿童龋易感性有明显的持续性。2.龋病发展进程中菌群结构存在富集性,Parascardovia, Streptococcus(链球菌属),Leptotrichia(纤毛菌属),Neisseria(奈瑟菌属),Prevotella (普氏菌属),Veillonella (韦荣球菌属),Corynebacterium(棒状杆菌属)与低龄儿童龋和重症低龄儿童龋相关,且在龋病的发展中有重要作用。多种菌群在龋病的发生发展中可能存在协同或是促进关系,并非单一种群致龋,再次验证了“生态菌斑学说”。3.全面了解纵向研究中菌斑微生物多样性对龋危险性评估具有重要意义；通过我们的研究,对后期低龄儿童龋的遗传概貌的研究奠定了基础框架。