由于文昌鱼在进化上的特殊地位,近年来成为众多免疫学家研究的热点。通过研究文昌鱼自身免疫的特点,寻找文昌鱼免疫相关因子,尤其是适应性免疫的分子,进一步揭示适应性免疫如何起源和进化,具有重要的意义。本文以厦门海域文昌鱼为研究材料,运用蛋白质组学、免疫学、分子学生物学等研究方法,对文昌鱼五种应激免疫反应进行研究,筛选和鉴定了多种和文昌鱼免疫相关的蛋白,并对其中最重要的肌酸激酶（creatine kinase,CK）在抵御病原菌感染中的作用进行了深入研究。在国内外首先采用差异蛋白质组学技术,研究了文昌鱼对盐度、皮肤划伤应激和对细菌感染、免疫攻毒等的体液或肌肉蛋白质组,发现了差异变化蛋白,探讨了其免疫保护特征,旨在初步阐明文昌鱼免疫进化特点。通过比较分析上述文昌鱼免疫反应的试验结果,发现了文昌鱼15个免疫相关因子,其中ribosomalprotein S10,CAVPT,Cathepsin,Intermediate filament protein以及CK在多种免疫反应中表达都发生变化,对进一步确定文昌鱼相关免疫因子具有重要的参考价值。特别重要的是,CK在双向电泳图谱中表现为11种不同形式的蛋白点,位于酸端的CK1的变化最为显著,值得进一步研究。通过Western blotting检测和酶活力测定,进一步证明割伤后体液中CK的酶活力和蛋白含量都有一个先升高再恢复的动态变化过程,说明CK是一个典型的APP。此外,通过对文昌鱼CK的克隆测序分析和磷酸化分析,探讨了CK在双向电泳图谱中表现形式的多样性的原因,推测这种多样性不是由基因多样性造成,而是由翻译后修饰造成的。通过pull-down试验证明,文昌鱼体液中的CK蛋白可以和多种细菌结合。纯化的原核表达CK可以使多种菌凝集,进一步证明了这种结合是一种直接的相互作用。通过酶活力测定发现,细菌菌体结合CK后能抑制其酶活力。不同菌对CK结合抑制能力不同,并且这种影响呈剂量效应。Far-western blotting和Co-IP试验证明了大肠杆菌通过OmpA,OmpX,OmpW三个外膜蛋白和CK直接结合。三个蛋白在Ecoli BW25113与突变株△OmpA,△OmpW和△OmpX的含量不同,并且对CK的影响能力也不同:OmpA和OmpW在菌体中含量大,对CK活力的抑制作用比较强,而OmpX的含量相对比较少,并且没有抑制作用。因此,Ecoli BW25113与突变株△OmpA,△OmpW和△OmpX对CK的结合能力和对其活力的抑制作用不同。Far-Western blotting的结果显示,OmpA和OmpW都同时和CK的两个结构域domainC及domainN结合,而OmpX仅和domainC结合,这可能是导致OmpX不能抑制CK酶活力的原因。RNA干扰试验说明,CK在文昌鱼抵御病原菌侵入方面有重要的作用。不同浓度的副溶血弧菌感染文昌鱼的试验和抑菌试验的结果表明,一定浓度的CK只能抑制一定数量的病原菌的生长,如果菌数目过多则不能达到抑制的目的。因此,我们推测文昌鱼的CK在抵御病原菌入侵的时候,既有识别功能,也具有一定抑菌作用。