【摘 要】
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半夏是天南星科多年生草本植物,以块茎入药,具有镇咳祛痰、抗生育、抗心律失常、止呕和抗肿瘤等多种药理作用。多糖作为半夏的主要活性成分之一,在抗肿瘤方面具有显著的研究意义。在本研究中,我们从半夏的干燥块茎中分离纯化出一种多糖级分（PTP）,研究了其结构和抗肿瘤活性,并进一步研究了其诱导人肝癌细胞Hep G2凋亡的凋亡机制。以半夏干燥块茎粉末为原料,通过热水（80℃）浸提,乙醇沉淀,除淀粉,Sevag法
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半夏是天南星科多年生草本植物,以块茎入药,具有镇咳祛痰、抗生育、抗心律失常、止呕和抗肿瘤等多种药理作用。多糖作为半夏的主要活性成分之一,在抗肿瘤方面具有显著的研究意义。在本研究中,我们从半夏的干燥块茎中分离纯化出一种多糖级分（PTP）,研究了其结构和抗肿瘤活性,并进一步研究了其诱导人肝癌细胞Hep G2凋亡的凋亡机制。以半夏干燥块茎粉末为原料,通过热水（80℃）浸提,乙醇沉淀,除淀粉,Sevag法除蛋白,真空冷冻干燥获得半夏粗多糖,经Sephacryl S-400 HR分离纯化得到半夏多糖组分PTP。采用苯酚-硫酸法测定PTP的糖含量为93.97±0.34%,糖醛酸含量为13.47±0.45%,表明PTP为酸性杂多糖。经高效液相色谱法测定PTP分子量为3.06×106 Da。通过离子色谱法测定PTP中阿拉伯糖:半乳糖:葡萄糖:甘露糖:葡萄糖醛酸:半乳糖醛酸的摩尔比为6.98:16.56:7.25:2.04:1:4.16。结合FT-IR和NMR光谱等分析结果发现PTP是含有α-构型和β-构型的吡喃糖,主要由β-D-半乳糖,α-D-葡萄糖,α-D-阿拉伯糖和β-D-甘露糖组成。通过分析MTT,细胞周期,Annexin V-FITC/PI染色试验,Hoechst33258染色和细胞形态学观察等试验结果可以得出,PTP可以剂量依赖性显著抑制Hep G2细胞的生长增殖,并诱导Hep G2细胞产生凋亡。此外,综合JC-1染色检测线粒体膜电位和蛋白免疫印迹结果来看,PTP处理可显著增加Hep G2细胞中促凋亡蛋白因子Bax的表达水平,并降低抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,从而导致细胞内线粒体膜电位的明显降低。线粒体膜的完整性被破坏促进了线粒体细胞色素c向细胞质的释放,并进一步激活Caspase级联反应。活化的Caspase-9和Caspase-3蛋白的表达水平显著增加,进而引起酶活性的丧失,最终导致Hep G2细胞凋亡。综上所述,PTP能够通过线粒体介导的内源性凋亡途径而诱导Hep G2细胞发生凋亡。
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